Reg4蛋白在结直肠肿瘤中的表达与其意义的分析

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1、濒江大学预士学位论文(pancfeatic出readprotein，聊瞪)。随后又陆续发现很多轴g相关基因，共同构成了Reg基因家族。Re妒基因是2001年Ha咖pee报道的新基因，目前是Reg家族成员中最短小的一个，编码158个羲基酸，21个氨基酸的信号肽，分子量17KD，最早在炎症槛肠病的文痒申筛选出它的cDNA，该基因与c型植物血凝素的碳氢化合物结合域有高度同源性。本实验室自1999年起利用抑制挂差减杂交的方法采筛选结直肠肿瘤发生的相关基因，并利用隋一个病人的正常粘膜，腺瘸和腺癌建立了三个差减文库(A_T，A—N，N

2、-T)，在A—N文库中我们筛选出一个未知基因，通过表达序列标签(EST)组装，BLAsT搜索，认定该基因与2001年Ha咖pee报遭的Re毋基因为同一基因。RT-PcR，Nof凼emblot和原位杂交的结果显示在正常粘膜、稼瘤、腺癌配对的标本中，Re殍悫腺瘤腺癌均较正常为高，而腺癌低于腺瘤。根据这些结果我们推测，Re妒可能是一个有效的提零早期癌发生尤其是腺癔癌变的指标。在此基础上，我们采用商品化的多克隆Re疹抗体，运用免疫组化Envision法检测了Re醴在正常人体组织中的表达情况，发现Rc彦蛋白特异地表迭于胃肠道粘膜，如

3、胃、小肠、阑尾和大肠，而正常胰腺、肝脏、腮腺等都不表达，并且Re舀阳性的细胞为两种形态不一的上皮细胞，一种从彤态和粘液染色的结果来看可以确定是外分泌细胞，而另一种细胞彤态上类似于肠道神经内分泌细胞，但是从之后我们所进行的cgA染色，类癌免疫组化染色和电镜的结暴来看，这种细胞并不是严格意义上的神经内分泌细胞，尽管有文献报道cgA与Re殍浙江丈学硬士学穰论文在部分嬲道上皮细胞呈共定位，但是免疫电镜的缝采清楚的显示，靴酗的阳性胶铱金颗粒与碑经内分泌颗粒劳苯位于弼一种蛔胞内，躅姥Re酗够为神经内分泌鲡魏捺态酶猿溅是不能戎立的。我靛

4、撂裁这静共定位是毒手多竞隆抗铱的交叉反应引趄。农89倒正常粘膜，腺癌黼黠的标本以及26倒正常粘膜，腺瘸，腺癌配对斡褥本孛，嚣e磐蛋白酶表迭跌正常嚣貘蕺骤瘤蒜巅骧癌是蠲显下黪秘，骧癌缀与正常皴，腺癌组与腺瘤缎的组闻差异均具有统计学意义。但是Re斛的表达与腺癌患糟的各种临床病理学糍标之间无相关褴。这种随分化降低确下降的趋势加上Re醪核臻麓穗细匏的耱点捷器亵热棒疑融够秘控细憨与嚣蕊道土皮于细胞之间可能有某种美联。由于蛋白质的功能最裁钠真正感兴趣的重点，所以我们采用敷物信息学的方法，利用NCBi，s谢ss_pdb诋粼锻，eP}差瑚

5、odd，d硅s住k，DNAS住r等崔线服务务受耪信惠学软辞对人类Reg家族肺凡令成爨都遗行了蛋鸯序列酶比较跌及三维结襁的模拟，尝试为功能研究提供基础。结激燕示Re驴与人类的另外几个Reg家族成受ReglⅨ，＆醇p，靴驴丧蛋白震一级结秘上相似性都越过了∞％，溪测它钠强结撬域爱菇穆秘都骞数量不等蟪翡繁密激酶磷酸税位点，蛋白激酶C磷酸化位点，十四娩基化饿点，最重要的建在遮四个分子中都发现了c—qpekc6n((奠D结构域，高度说明避姻个不同的基因谴他上的保守性，并殿提示了它船磅能上百绝有趣拟甚委麴赋池楚。三缀藉鹌的模拟是囊丹麦技

6、豢交学@S中心的Cp}{model服务器上避行的，得载蹲个分予的模拟结构屠我们蒋Re舀袋，毒浙援走学预士学能论文Re甜黟，Re炉与Rc萨避静比较，发现婢者结秘粳似，高分值氨基酸占副套部摩磁鲢褐％～72％，赢显森碑书分予中共骞2毒夸氨藩黢呈高痍擐夺。这如进一步提零了它们在功毙土霹缒鬻秘椒之处。本研究明确了＆酗蛋白在媳常人体内的组织分带，结果农明，＆鼢藏一个胃脑遵特姆妁耨惠物，劳强发瑰了它农掰嬲道上皮接内的知撼定位，另外遁过免疫鳃毅他学染色发珑了它在意菇常熟艨瘸载骧癌的肿瘤发囊鞫上表这下除秘瑰筑，加毒在上爱屡建辩定拉特点，裁热

7、挺斑?鼗e萨麓往级媳毒胃肠莲苄搬鼹之麓鸯慕瓣关联稚猜怒。对Re黪翳螽的磅巍酶了辫是建立在诗蓦孰随绻获驭§§傣惑鼹基础上，裁钠蠢髓了融g家族麟聋争人类成簧在一级鳍鞠和羔级枯鞠上龆毒嵩嶷斡穰钕醺，说鹳?＆酗鼍鼹在功能量毒其他三孝骞秘钕蠢楚。S漪溉犬学硪圭学使论文E酾羚ssi潍觚dSi黼i蠡eaneeofRe酣EX移feSS董13I芏la髓QSl譬瓣l圭王ea敷eeO芏皇

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