《菌种的选育鉴定》PPT课件

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1、第二节工业微生物菌种的选育和鉴定菌种获得从菌种保藏机构直接购买所需的菌株从自然界分离筛选从生产过程中发酵水平高的批号中重新进行分离筛选国内菌种保藏机构1）普通微生物菌种保藏中心：中科院微生物研究所2）农业微生物保藏管理中心：中国农科院3）工业微生物保藏管理中心：中国食品发酵工业研究院4）医药微生物保藏管理中心：5）兽医微生物保藏管理中心：农业部兽医微生物研究所6）CCTCC:ChineseCentreforTypeCulturesCollections,WuhanUniversity,Wuhan,Hubei,430072,Chi

2、na.细菌：卫生部真菌：中国医科院皮肤病研究所（南京）病毒：中国医科院病毒所新抗生素：四川抗生素工业研究所生产用抗生素：华北制药厂1）美国典型菌种收藏馆（ATCC）2）美国农业研究服务处菌种收藏馆3）英国国立标准菌种贮藏所：4）法国巴斯德研究所：教学科研免费5）德国微生物和细胞收藏所6）日本微生物菌种保藏联合会（JFCC）国外菌种保藏机构不承担鉴定业务，工业菌种收费保藏，教学科研菌种免费供应不收集不能形成冻干保存的菌种菌种选育菌种选育工作大幅度提高了微生物发酵的产量，促进了微生物发酵工业的迅速发展。通过菌种选育，抗生素、氨基酸、

3、维生素、药用酶等产物的发酵产量提高了几十倍、几百倍、甚至几千倍。菌种选育在提高产品质量、增加品种、改善工艺条件和产生菌的遗传学研究等方面也发挥了重大作用。菌种选育的目的是改良菌种的特性，使其符合工业生产的要求。一、自然选育在生产过程中，不经过人工诱变处理，根据菌种的自发突变而进行菌种筛选的过程，叫做自然选育或自然分离。自然选育：从自然界分离获得菌株根据菌种的自发突变进行筛选而获得菌种。1.从自然界分离获得菌株样品采集样品预处理目的菌富集培养菌种初筛菌种复筛菌种发酵性能鉴定菌种保藏采样样品来源要广泛微生物代谢特点和生产目的相结合考

4、虑微生物的生理类型土壤样品：有机质含量和通风状况，pH，水分，季节，地理条件等预处理物理法：热处理、膜过滤、离心等化学法：添加几丁质的培养基诱饵法：花粉、毛发等分离前样品加热处理处理条件样品分离的放线菌40℃，2～16h土壤、植物根链霉菌55℃，6min水、土壤、粪便小单孢菌、链霉菌、红球菌、嗜酸放线菌和嗜碱放线菌等55℃干热，10d土壤高温放线菌100℃干热，15min土壤马杜拉放线菌100～120℃干热，1h土壤马杜拉放线菌、小双孢菌，小四孢菌，孢囊链霉菌纯种分离施加选择性压力分离法控制培养时的氧气、温度、pH、盐浓度、碳源

5、等添加抗生素随机分离方法生化诱导分析法（BIA）-λ诱导检测法-将大肠杆菌的lacZ基因连接在λ噬菌体的PL启动子下，当DNA损伤时，诱发λ阻遏蛋白CI分解，PL启动子启动lacZ基因转录，测定表达的β-半乳糖苷酶活性来检测能损伤DNA的抗肿瘤药物的存在。分离培养基合成培养基——精氨酸培养基，高氏合成一号培养基，天门冬素培养基，察氏培养基等有机培养基——Waksman培养基，Bennett培养基几丁质培养基——只有放线菌能够利用几丁质，生长的菌落小，白色，需转接到产可溶性色素的适当培养基上加以区分HV培养基——以土壤腐殖质为唯一

6、碳源和氮源的培养基总的要求：尽量使样品中的全部放线菌都生长出来，而其他微生物（细菌和真菌）又尽可能不长。抑制剂的使用加入抗真菌试剂（制霉菌素、两性霉素B、放线菌酮、丙酸钠以及使真菌形成较小菌落的rosebengal等），抑制真菌生长；加入抗细菌抗生素（青霉素、链霉素）抑制细菌生长，增加放线菌的分出率；加入某些抗生素也可抑制部分放线菌，有利于分离到一定种类的放线菌。如新生霉素有利于分离北里孢菌属。2.从自发突变体中获得菌株变异是育种的基础。自然突变是指自然条件下出现的基因变化。自发突变的频率较低，因此自然选育筛选出来的菌种，不能满

7、足育种工作的需要。因而不能仅停留在“选”种，还要进行“育”种。如通过诱变剂处理菌株，就可以大大提高菌种的突变频率，扩大变异幅度，从中选出具有优良特性的变异菌株——诱变育种。二、菌种鉴定多相分类分子分类化学分类数值分类传统分类计算机应用形态、生理生化特征细胞壁、细胞膜组成和结构等DNA，RNA等利用微生物多种不同的信息，包括表型的、基因型的和系统发育的信息，综合起来研究微生物分类和系统进化的过程。1、经典分类鉴定方法形态学特征生理生化特征血清学试验和噬菌体分型特征分析方法观察点菌体染色反应革兰氏染色法G＋，紫色；G-，红色菌体大小

8、和形状光学显微镜，测微尺；透射电镜菌体排列或分支情况鞭毛鞭毛染色（银染法）；透射电镜有无，着生部位，数目芽胞芽胞染色（孔雀绿染色法，简单染色法等）；透射电镜有无，芽胞位置和形状，孢囊是否膨大细胞内含物染色；透射电镜内含物类别（聚β-羟基丁酸颗粒或硫磺颗粒等）荚膜