CD48与CD244在类风湿关节炎患者外周血T细胞上的表达与意义

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1、CD2一样，CD244(284)与CD48组成受体、配体对同样能促进T细胞的激活和增殖，CD48与CD244的亲和力是与CD2亲和力的5—10倍。而人CD244与CD48的高亲和力表明他们的相互作用有重要的生物学作用。研究表明，活化T细胞及记忆T细胞表面的CD244与临近的T细胞上的配体CD48相互作用从而对其起协同刺激样作用；NK细胞上的CD244与T细胞表面的CD48作用可以促进CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖。实验目的本实验采用流式细胞仪检测技术，对类风湿关节炎患者外周血T细胞上协同刺激分子CD48、CD244的表达情况进行了检测，并分析其表达情况的临床意义，以期为R

2、A的发病机制开拓一个新的领域。材料与方法1．实验对象：30例我院风湿免疫科住院患者，符合1987年美国风湿病协会(ARA)制定的RA诊断标准。所有RA患者近3个月均未应用过糖皮质激素和慢作用抗风湿药。选择我市献血人员30例作为对照组。RA组与对照组性别、年龄构成比上在统计学上无显著性差异，P>0．05。2．主要试剂及实验仪器：流式细胞仪(FACScan，美国BD公司生产)，低温离心机(日本TOSHI—BA公司生产)，恒温水浴循环仪(日本TOSHIBA公司生产)。FITC荧光标记的鼠抗人CD48单克隆抗体，FITC荧光标记的鼠抗人CD244单克隆抗体，PE荧光标记的鼠抗人CD3单

3、克隆抗体，Per—CP荧光标记的鼠抗人CD8单克隆抗体，红细胞裂解液(RBLC)，磷酸盐缓冲液(PBS)，以上试剂均来自美国BD公司。3．实验方法：将4ml抗凝血分别向两个流式细胞管中加入100I-zl，第一管再加入FITC荧光标记的鼠抗人CD48单克隆抗体工作液10t_L1，PE荧光标记的鼠抗人CD3单克隆抗体工作液5肛l，Per—cP荧光标记的鼠抗人CD8单克隆抗体5仙l；另一管再加入FITC荧光标记的鼠抗人CD244单克隆抗体工作液10p。l，PE荧光标记的鼠抗人CD3单克隆抗体工作液5斗l，Per—cP荧光标记的鼠抗人CD8单克隆抗体5肛l。避光孵育15分钟后加入3ml

4、·2·红细胞裂解液后至透明，放入低温离心机，在4qC1000rpm条件下离心4分钟，取出样本，弃上清。分别加入2ml磷酸盐缓冲液，离心4分钟，取出样本，弃上清。重复上一步。加入0．3ml磷酸盐缓冲液，进行流式细胞仪检测。以”门技术”划定淋巴细胞，测定每个标本门内50000个细胞。测定结果用CellQuesPlot软件进行数据分析。分别记录淋巴细胞表面平均荧光强度。统计学方法：所有数据均用SPSSll．5软件分析。实验结果(1)Pb周血T细胞亚群情况：RA组外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4与CD8比值分别为21．15±6．97％、48．16±7．67％、2．60-I-

5、1．23，而对照组分别为26．57±7．03％、46．96±7．30％、1．91±0．65。RA组外周血CD8+T细胞低于对照组，P<0．01，有非常显著性差异。RA组外周血CD4+T细胞高于对照组，P>0．05，元显著性差异。RA组CD4与CD8比值高于对照组，P<0．05，有显著性差异。(2)外周血CD8+T细胞、CD4+T细胞表面CD48、CD244的平均荧光强度：RA组外周血CD8+T细胞表面CD48、CD244的平均荧光强度分别为3l。63±9．98、6．46±1．28，对照组分别为38．76±8．72、6．08±1．44。RA组外周血CD8+T细胞表面CD48的平均

6、荧光强度明显低于对照组，P<0．01，有非常显著性差异，而外周血CD8+T细胞表面CD244的平均荧光强度与对照组比较P>0．05，元显著性差异。RA组外周血CD4+T细胞表面CD48、CD244的荧光表达强度分别为48．92±10．18、3．04±0．54，对照组分别为46．48±8．44、3．23±0．64。RA组外周血CD4+T细胞表面CIM8的平均荧光强度高于对照组，P>0．05，元显著性差异，外周血CD4+T细胞表面CD244的平均荧光强度与对照组比较P>0．05，无显著性差异。结论(1)类风湿关节炎患者存在外周血T细胞亚群的异常。外周血CD3+CD8+T细胞数量减低

7、使CD4+T细胞和CD8+T细胞的比值升高，从而辅助性T细胞功能相对亢进，抑制性T细胞功能相对减弱在类风湿关节炎的发病过程中起作用。·3·(2)类风湿关节炎患者外周血CD8+T细胞上CD48分子的表达明显低于对照组，CD48分子的表达减低使激活的CD8+T细胞的数量减少，抑制性T细胞作用减弱可能在类风湿关节炎的发病过程中起作用。关键词类风湿关节炎；CD8+T细胞；CD4+T细胞；CD48；CD244．d·(：：垂囊叵=)TheExpressionandSignificanceofCD48an