《自身抗体的检测》PPT课件

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1、自身抗体的检测及应用鄂尔多斯市中心医院检验科曹青凤2012.9.19抗核抗体（ANA）的检测与临床应用抗核抗体的定义传统定义：针对细胞核成分抗原总称。广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成份，而是指核质和核蛋白的总称。ANA测定原理和方法：间接免疫荧光法（IIF):现多以Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极大地提高了ANA检测的阳性率和滴度。是系统性红斑狼疮（SLE）的标准筛选试验。我们实验室采用欧蒙荧光检测系统，将1:100作为血清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:100阳性，只

2、能视为一个临界可疑值，临床意义不大。ANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。ANA的靶抗原分布整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。ANA检测的临床意义ANA可见于多种自身免疫性疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织疾病的诊断，病情判断和疗效观察的指标已证实ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间，其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低，

3、为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类型风湿病意义重大。⑴SLE活动性：占95%-100%，非活动性：占80%-100%。（2）药物诱导的SLE：占100%。（3）混合性结缔组织疾病：占100%。（4）其它风湿性疾病：占20%-50%（5）进行性系统硬化症：占85%-95%。（6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。（7）干燥综合征：占70%-80%。（8）慢性活动性肝炎：占30%-40%。（9）溃疡性结肠炎：占26%。常见疾病其它还可见于：非结缔组织疾病中也可出现阳性；正常人（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型；高滴度A

4、NA则高度提示自身免疫性疾病。ANA（＋）的原因风湿性疾病SLE多发性肌炎干燥综合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性＞男性，出现率随年龄而增加风湿性疾病患者亲属？孕妇药物诱导慢性肝脏疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系统异常恶性肿瘤SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释技术方面临床方面经皮质激素或免疫抑制剂治疗。终末期肾病。隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组织。由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。ANA的荧光染色型别细胞核：核均质型（DNA、组蛋白和核小体等）核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白）核膜型（板层素、g

5、p120等）核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）细胞浆：胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：ANA筛查的方法间接免疫荧光法（IIF）基质组合为：HEP-2细胞+灵长类肝（猴）核颗粒型：核粗颗粒型抗核抗体染色类型核仁型（nucleolar）均质性（homogeneous）ANA的荧光类型ANA试验的结果中一般会报告其分型，这些分型可能与某一特定的抗原反应活性

6、相关。分型相关疾病核仁型硬皮病着丝点型CREST综合征周边型SLE斑点型/弥散型混合性结缔组织病（MCTD）抗双链DNA抗体（ds-DNA）的检测与临床应用检测：测定抗ds-DNA以血鞭毛虫属的绿萤短膜虫为靶抗原基质，可联合使用HEp-2细胞及灵长类肝组织检测。自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。抗dsDNA抗体荧光模式：绿蝇短膜虫：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。Hep-2细胞：细胞核的均质型荧光。临床应用抗双链DNA抗体（ds-DNA）是系统性红斑狼疮的特异性抗体，其阳性率因检测方法而异，在40-90%。但抗ds-DNA阴性并不能排除患有

7、SLE的可能性。抗ds-DNA抗体具有预测价值，85%的出现抗ds-DNA抗体的健康人在五年内发展为SLE。已证实抗ds-DNA抗体参与SLE的病理过程，在疾病形成过程中，抗ds-DNA和其抗体形成的免疫复合物沉积在皮下毛细血管、肾和其他器官内，激活补体系统，从而导致组织损伤。抗体水平与疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗ds-DNA抗体滴度可以下降或消失。ANA谱3检测及临床应用抗RNP/Sm抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核粗颗粒，核仁阴性。肝组织切片：同上。荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。抗RNP/Sm抗体自身抗原：抗原RNP和Sm属于一组

8、小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多种蛋白质组成，RNA中尿苷（U-RNA）含量较高。临床意义