《糖的组织化学》PPT课件

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1、组织化学histochemistry特殊染色,通过应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色试剂,定位地显示病变组织细胞的特殊化学成分,同时又能保存原有的形态改变,达到形态与代谢的结合.可用于检测细胞内的酶类、糖类、脂类、核酸、某些金属元素等。糖的组织化学糖的分类单糖和双糖多糖：淀粉、纤维素、糖原粘液物质（粘多糖）中性粘多糖酸性粘多糖糖蛋白粘蛋白氨基己糖>4%糖蛋白氨基己糖<4%5.糖脂含有半乳糖,脂肪酸,神经氨基醇糖原一.糖原的概念由多糖衍化而来，是天然存在于动物组织内的多糖分布：胞浆内肝、心肌、骨骼肌同种葡萄糖的聚合物作为糖原染色的切片，必须冰冻或经特殊固定液固定后进行切片二.固定剂的选

2、用Carnoy（冷4℃）无水乙醇60ml防止糖原溶于水氯仿30ml增加渗透力冰醋酸10ml抵消乙醇对组织的收缩、硬脆作用*优点：固定迅速，保存肝糖原2.Gendre（冷4℃）苦味酸无水乙醇饱和液80ml甲醛15ml冰醋酸5ml临用前混合配制3.Lillie固定液（AAF）无水乙醇85ml冰醋酸5ml甲醛10ml固定液预冷4℃，固定24h后，95%乙醇脱水，包埋三.固定中注意事项1.尽可能取小块新鲜组织及时固定，不用水溶性固定液2.应用含酒精的溶液作为固定液，但最好不单独使用乙醇固定，以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳3.固定原理：使糖原与固定液之间相结合的蛋白质凝固，糖原被周围凝固的蛋白质膜保护

3、起来，四.显示糖原的方法1.碘染色2.胭脂红染色*3.过碘酸-Schiff反应4.银浸染法过碘酸-Schiff反应Periodicacid-Schiff,PAS(一）染色原理过碘酸是一种强氧化剂，能氧化糖分子，使相邻二个碳原子上的羟基（-OH）变为醛基（-COOH）Schiff氏试剂是付品红（碱性品红）经SO2作用后，形成的无色溶液付品红Schiff试剂当Schiff氏试剂与醛基作用后，形成含有发色基团的化合物，呈现紫红色沉淀*PAS反应的基本原理1.通过过碘酸的氧化作用，将糖分子中的碳键打断，游离出醛基2.醛基与Schiff试剂反应显出红色沉淀(二)染色步骤1.切片脱蜡至水2.1%过碘酸溶液

4、内氧化5-10min3.流水洗5min,再用蒸馏水洗4.用Schiff试剂处理10-20min5.流水洗10min6.复染(可用Mayer明矾苏木素或甲基绿衬染细胞核)7.脱水、透明、封片切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检。肝糖原-PAS染色X200肝糖原-PAS+苏木素复染X200【结果】胞浆内PAS阳性物质呈紫红色，颗粒状或均质团块状，胞核呈蓝色或绿色红色深浅反应含糖原量的多少【对照】采

5、用淀粉酶或唾液酶消化切片对照片PAS（-），未处理片（+）PAS反应阳性物质物质类别举例染色强度多糖糖原强中性粘液物质结肠杯状细胞强某些酸性粘液物质酸性非硫酸性含唾液粘多糖中基底膜肾小球基底膜中色素脂褐素中脂质脑苷脂中淀粉样物淀粉样物弱软骨软骨弱真菌曲菌强脑垂体粘液样细胞强ThisnormalglomerulusisstainedwithPAStohighlightbasementmembranes.Thecapillaryloopsoftheglomerulusarewell-definedandthin.A888kidney11-PASA888kidney14-PAS（三）PAS反应的应用

6、证明与鉴别细胞内空泡样变性（水变性、脂肪变性、糖原）心肌病变及其它心血管疾病的诊断和研究糖原累积病的诊断及研究糖尿病的诊断及研究某些肿瘤的诊断与鉴别肝细胞水变性肝脂肪变性(石蜡切片)肝脂肪变性(冰冻切片)脂肪特染：苏丹III糖原累积症PAS（+）PAS（-）肝细胞癌胆管癌横纹肌瘤颗粒细胞肌母细胞瘤Ewing肉瘤骨的网织细胞肉瘤（四）注意事项1.过碘酸溶液与Schiff试剂均可反复使用多次，用后密封放入冰箱4℃保存2.新鲜配成的溶液与应用过的作用时间不同，刚配成的作用时间短，以后逐渐延长3.过碘酸溶液在作用前应与室温接近，温度太低，造成氧化不全，影响效果4.Schiff试剂如呈淡红色，则应弃去重

7、配5.Schiff试剂配法很多，区别不大，可以随意选用6.Schiff试剂作用时，染色缸必须加盖，不然Schiff试剂将因SO2消失而失效Schiff试剂碱性复红1g1N盐酸20ml偏重亚硫酸钠1g重蒸馏水200ml粘液物质(粘多糖)人体的各种腺体及其他许多组织、细胞，如结缔组织、纤维母细胞、软骨基质等都能合成和分泌粘液物质，统称为粘多糖或粘液分类中性粘多糖酸性粘多糖1.硫酸化粘液物质结缔组织（强