《组织切片制作》PPT课件

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1、组织切片技术概述制片方法的种类：非切片法、切片法制片方法的一般步骤：切片法（1）杀死、取材与固定（2）洗涤（3）脱水（4）透明（5）透入（6）包埋（7）切片（8）贴片（9）染色（10）封藏非切片法（1）整体封藏法（2）涂片法（3）磨片法（4）分离法（浸渍分离法、撕碎法）（5）压碎法石蜡切片技术石蜡切片法是将组织经过一系列药品处理，使石蜡渗入组织，包埋成蜡块，再把组织蜡块切成极薄的片子，根据不同的需要用不同的染色方法以显示不同细胞和组织的形态，以及细胞和组织中某些化学或特殊（如抗原）成份含量的变化。一、取材取材应注意事项：切取组织应根据需要观

2、察的部位进行选择。所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层，同时考虑好切面方向。病理组织除切取病变部位外，还要切取病变和正常组织交界区域，以利观察分析。切取的组织必须新鲜。取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形，发生自溶现象。3切取组织，刀要锋利，动作要轻，不可来回切割，也不要挤压或牵拉组织，以免组织变形或内部细胞结构受损伤而发生变化。4切取的组织块必须小而薄。组织块的大小一般为0.5×0.5×0.2cm、1×1×0.3cm或1.5×1.5×0.3~0.5cm，最厚不能超过0.5cm。另：柔嫩组织、被膜厚而坚实的器官、小动物的器官及组织

3、5采取消化道组织时应保持清洁。6防止材料因固定剂的作用而发生变形。如：柔嫩、薄的材料，有空气的组织7、组织块附加标记的方法采取的不同组织块，必须根据切片的要求和需要分瓶放入进行固定，加标签以示区别，并注明固定液、名称、来源、日期等等。二、固定固定就是将采取的新鲜组织，放入固定液内，借助化学药品的作用使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成份沉淀保存下来。同时，使组织硬化不变形，有利于固定以后的处理。固定时间应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、渗透力的强弱而定。如：一般组织，以10％福尔马林固定24h左右，波音(Bouin)氏固定

4、液12至24h，卡诺氏(Carnoy)固定液1h内。适当地增加温度可缩短固定时间。固定液的用量应充足，一般为组织块体积的10倍左右。3常用固定液（1）单纯固定液福尔马林固定液：甲醛10ml蒸馏水90ml优点：透渗能力强，固定均匀，组织收缩小。缺点：但经乙醇脱水后收缩较大。酒精固定液：无水乙醇（纯酒精）85ml（或95ml）蒸馏水15ml（或5ml）除此之外，还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、丙酮等单纯固定液。优点：有固定兼脱水作用，固定后可直接放入85％－95％酒精中脱水。对糖原、纤维蛋白和弹性纤维等固定效果好。缺点：但固定速度较慢，易使组

5、织变脆。一般先用85％酒精固定数小时再放入95％酒精继续固定。（２）混合固定液波音(Bouin)氏固定液：饱和苦味酸水溶液75ml甲醛75ml冰醋酸5ml渗透迅速，固定均匀，组织收缩小，切片着色良好。卡诺氏(Carnoy)固定液：无水乙醇60ml三氯甲烷（氯仿）30ml冰醋酸10ml固定速度快，可固定细胞浆和细胞核，尤其适宜染色体的固定.中性福尔马林固定液甲醛100ml蒸馏水900ml磷酸二氢钠4g磷酸氢二钠6.5g渗透性好，组织收缩小，固定效果好。此外，还有辛克(Zenker)氏液、酒精福尔马林液(A·F·)等混合固定液。三、洗涤（或水洗

6、）目的：组织在固定后要把渗入里面的固定液洗去，否则留在组织中的固定液有的会妨碍染色，有的会产生沉淀或结晶。原则：1、固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。2、固定液为甲醛水溶液或以水配制的可用流水冲洗。3、冲洗的时间与组织的种类，组织块大小和固定时间长短有关。一般10-24h。方法：流水缓慢冲洗。小组织可不冲洗，多次换水浸泡即可。四脱水组织经固定和水洗后含多量水分，水与透明剂、石蜡不能溶合，因此，在透明、浸蜡前必须进行脱水，把组织中的水份彻底驱除。常用脱水剂：酒精注意事项：1、一般从70％酒精开始，由低浓度酒精到高浓度酒精逐步递增。如果固定

7、液为酒精溶液，则应从与固定液中相同浓度的酒精开始脱水。2、对一些柔软组织低等无脊椎动物组织需增加酒精级数，缩小浓度差异，应从70％酒精以下50％或30％开始脱水，否则收缩较大。3、脱水的时间根据组织的种类、体积大小和厚度而定，一般与组织的大小成正比。4、脱水必须在有盖瓶子内进行。酒精浓度脱水时间45~50℃恒温箱中脱水时间70％2~4h30~40min80%2~4h30~40min90%或95%2~4h1h无水乙醇I2h1h无水乙醇II2h1h一般组织酒精脱水的浓度及时间如下：五、透明为使石蜡能浸入组织块，组织脱水后，必须经过一种既能与酒精

8、相混合，又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，而达到石蜡浸入组织块的目的。常用透明剂：二甲苯注意事项：1、组织不能在二甲苯透明过久，在时间上应加以控制。2、组织在入二甲苯透