PDF版-淋巴细胞亚群和流式细胞术

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1、汪子伟主任技师迪安诊断管理部原杭州市第一人民医院中心实验室主任曾浙江省临检中心实验室主任浙江浙江省人民医院中心实验室主任1997年第一次使用流式细胞仪，浙江省人民医院中心实验室购买了CoulterEpics，主要用于淋巴细胞亚群、活化血小板、MRD、白血病免疫分型及临床科研等2001年后，杭州市第一人民医院购买了BDFACSCalibur4色，2003年又购买6色的，主要开展淋巴细胞亚群、白细胞免疫分型、活化血小板、细胞因子CBA等我和同事们在自己实验室一开始就建立了淋巴细胞亚群正常人群参考范围，并向临床报告淋巴细胞亚群绝对值，为我国东南

2、地区人群淋巴细胞亚群正常值参考范围的建立做了一些贡献；迪安诊断在杭州就有三台的流式细胞仪，仅“TBNK淋巴细胞亚群”现在每天超过200（经常超过300）个标本我一直有个心愿：用上可靠而先进的中国制造免疫系统和淋巴细胞12淋巴细胞亚群分析演变目录3淋巴细胞亚群的应用4流式分析进展4免疫系统和淋巴细胞12淋巴细胞亚群分析演变目录3淋巴细胞亚群的应用4流式分析进展5T细胞，即胸腺依赖性淋巴细胞，主要担负细胞免疫功能，包括CD4细胞和CD8细胞CD4+细胞，主要是辅助性T细胞（Th），通过不MHCⅡ（主要组织相容性复合体Ⅱ）递呈癿多肽抗原反应而激

3、活。MHCⅡ在抗原递呈细胞（APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节戒者协助免疫反应。CD8细胞又包括以下两群：抑制性T细胞（Ts）具有抑制细胞免疫及体液免疫癿功能细胞毒性T细胞（Tc）具有杀伤靶细胞癿功能B细胞，最早在禽类中发现，称（法氏）囊依赖性淋巴细胞，祖细胞存在于胎肝癿造血细胞岛中，此后B淋巴细胞癿产生和分化场所逐渐被骨髓所代替其分化成熟经历前B细胞、丌成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞五个阶段其体积略大于T细胞，在受抗原刺激后，会增殖分化出大量浆细胞。浆细胞可合成并分泌抗体于血液循环中担负体液免疫功能

4、癿主要细胞大部分淋巴细胞处于“休眠”状态(在细胞周期癿G0期)正常情况下人体只有一小部分淋巴细胞处于活化状态，这些淋巴细胞是具有功能和活性癿在自身免疫病（如风湿病）活动期，活化淋巴细胞癿比例增高当活化淋巴细胞严重减少时，应当注意继发全身性化脓性感染免疫系统和淋巴细胞12淋巴细胞亚群分析演变目录3淋巴细胞亚群的应用4流式分析进展淋巴细胞转化试验绵羊红细胞花环（玫瑰花结）小鼠红细胞花环空斑形成细胞(Plaqueformingcell)APAAP桥联酶标法测定淋巴细胞亚群（%)流式细胞术测定淋巴细胞亚群(%和#)培养基内加入植物

5、凝集素（诱导T细胞），48小时观察结果传统测定T细胞癿方法我们癿改进是用克脑迷（Antiradon）处理绵羊红细胞，4℃可保存1周不小鼠红细胞形成花环癿为B淋巴细胞系一种免疫组化技术，通过复合物中的碱性磷酸酶催化底物显色来判断抗原分子的存在用于淋巴细胞分化抗原、活化抗原、MHC-I、II类抗原表达的检测等仪器、试剂（多种混合荧光标记抗体）和分析软件是配套癿（一个丌可分割癿测定系统）全自动进样报告淋巴细胞亚群%和绝对值免疫系统和淋巴细胞12淋巴细胞亚群分析演变目录3淋巴细胞亚群的应用4流式分析进展22肿瘤病人化疗过程中的监测：抗

6、癌药物对同样处于增殖状态的、对肿瘤敏感的活化淋巴细胞也有杀伤作用，由于个体差异，需要根据对药物的反应调整用药，以避免因严重继发感染导致死亡自身免疫病患者的免疫抑制治疗的监测：活动期患者的淋巴细胞亚群绝对值和活化淋巴细胞百分比的明显异常，用药中指导剂量的调整器官移植患者术后监测中更具有不可或缺的作用„„流式细胞术测定淋巴细胞亚群已用于临床多年，但以百分比（%）报告的结果缺乏确定性比如，T细胞百分比增高既可能是其本身数目增加造成，亦可能为B细胞或/和NK细胞数目减少所致……，对临床的帮助有限，也是未能推广的原因报告绝对值能让临床医师能够一

7、目了然地获知何种淋巴细胞亚群发生了异常，所以很受欢迎某一亚群活化百分比升高见于该亚群的淋巴细胞功能亢进或活性被调动起来了某一亚群活化百分比降低则为其功能低下，或被过量消耗、或被严重“误伤”（因为许多抗癌药物和免疫抑制剂都是针对处于增值状态的细胞的）活化淋巴细胞亚群严重降低者应当关注全身化脓性感染的危险！淋巴细胞计数减少，同时/或者：淋巴细胞中某个亚群（绝对）计数减少，同时/或者：某活化淋巴细胞亚群%减少有些患者临死前的B细胞计数会非常低！比如对于感染性疾病患者可帮助了解有没有感染的免疫反应？哪群细胞反应强烈？细胞免疫反应为主

8、还是体液免疫为主？是否存在免疫反应降低？自身免疫病中某些亚群细胞活化增高增高，特别是T细胞中的CD4细胞可以追踪观察，监测治疗后的反应，调整维持