《液相色谱》课件

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1、2021/7/25第二章高效液相色谱分析法一、高效液相色谱仪HPLC二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一节高效液相色谱的特点与仪器highperformanceliquidchromatographfeatureandinstrumentofHPLC2021/7/25色谱法的用途用途：色谱法已广泛用于各个领域，是多组分混合物首选的分离分析方法。以《中国药典》2005版为例，一部收载中药1146个品种，用薄层色谱进行鉴别或含量测定的有1523项，用高

2、效液相色谱进行定量分析的有479种518项，用气相色谱进行检测的有47种。二部收载的有1967个品种，采用高效液相色谱法的品种有848种。现在色谱法已形成一门专门的科学。2021/7/252021/7/25色谱柱2021/7/25RichardLaurenceMillingtonSyngeArcherJohnPorterMartin"fortheirinventionofpartitionchromatography".1952年诺贝尔化学奖得主2021/7/25一、高效液相色谱法的特点featureofHPLC特点：高压、高效、高速、高灵敏度高沸点、热不

3、稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2021/7/25三、流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC1.流程2021/7/25二、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph2021/7/25液相色谱仪（2）2021/7/25液相色谱仪（3）安捷仑公司1100agilent1100Hplc瓦里安Varian----Prostar230/325/3632021/7/25液相色谱仪（4）2021/7/252.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而

4、使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性2021/7/25单向阀2021/7/25(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2021/7/25(3)进样装置流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：2021/7/25(4)高效分离柱柱体为直型

5、不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2021/7/25(5)液相色谱检测器a.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。2021/7/25b.光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。2021/7/252021/7/25光电二极管阵列检测器2021/7/25c.示

6、差折光检测器（differentialrefractiveindexdetector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种；2021/7/25d.荧光检测器（fluorescencedetector）高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；2021/7/25e.电导检测器属电化学检测器,广泛应用于离子色谱.一对镀

7、铂黑的铂电极,构成电桥的测量臂2021/7/25f.发光散射检测器(ELSD)ELSD适用挥发性低于流动相的待测物分离。事实上，新一代ELSD检测器在操作上提供更低的温度，允许半挥发性被分析物的定量，即使检测器的灵敏度可能较低。不挥发溶质，在分析柱的检测极限可以达到毫微克(ng)水平。澳大利亚的UnionCarbide研究实验室ELSD最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物，如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物。ELSD检测只要分为三个步骤：（1）用惰性气体雾化脱洗

8、液（2）流动相在加热管（漂移管）中蒸发（3）样品颗粒散射光后得到检