《植物体细胞杂交》PPT课件

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1、植物体细胞杂交周有文主要内容体细胞杂交研究历程及一般概念体细胞杂交的一般流程杂交细胞的鉴定及相关应用领域细胞杂交的相关文献4123我们从以下几方面来探讨植物体细胞杂交技术。发展历程70年代，技术建立和完善优化1972年获得烟草种间体细胞杂种1975年高Ca高pH加PEG融合方法，电融合法大量成功报道，不少为异想天开的实验80年代初，由模式植物转向农作物/经济作物，对称融合到非对称融合，创造新种质的技术手段80年代末，大量木本植物细胞融合成功的报道90年代至今，成为一种育种手段植物体细胞杂交的几个重要进

2、展1960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功；1971年，Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株；1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，这是第一个植物体细胞杂种；1974年，Kao将聚乙二醇（PEG）诱导融合法应用于植物细胞融合并建立了相应的融合技术；1978年，Melchers获得第一个属间体细胞杂种（番茄＋马铃薯）；1981年，Zimmerman发明了电融合仪，并首次提出了电融合概念；1987年，Schweiger建立了单对原生质体

3、电融合技术程序。体细胞杂交的一般概念体细胞杂交，即原生质体融合，将两个不同亲本的原生质体，经人工诱导融合并培养再生成株的过程，统称为体细胞杂交（A+B）。根据概念，在理论上任何细胞都可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。体细胞杂交

4、与有性杂交的异同比较内容体细胞杂交有性杂交时间无季节限制花期限制，特别是母本的花期亲缘关系一定程度上可以克服有性/嫁接不亲和性受亲和性影响结果细胞核、细胞质均可以重组、倍性增加双受精，一般无细胞质重组，倍性不改变几种不同的表述：体细胞杂交：Somatichybridization细胞融合：Cellfusion原生质体融合：Protoplastfusion无性杂交：asexualhybridization超性杂交：Parasexualhybridization超性融合：Parasexualfusion细

5、胞操作：Cellmanipulation细胞工程（Cellengineering）体细胞杂交步骤：1原生质体的制备2原生质体的融合3杂种细胞选择4杂种细胞培养5由愈伤组织再生植株6杂种植株的鉴定植物体细胞杂交技术的过程：杂交的两个细胞用纤维素酶、果胶酶处理细胞壁原生质体Ａ、Ｂ经离心、振动、电刺激用聚二乙醇（ＰＥＧ）诱导融合后的原生质体再生细胞壁杂种细胞脱分化细胞分裂愈伤组织杂种植株再分化（植物体细胞融合完成的标志）植物细胞融合植物组织培养植物细胞A植物细胞B去壁去壁原生质体A原生质体B融合融合的原生质

6、体AB再生细胞壁杂种细胞AB脱分化愈伤组织杂种植株再分化植物细胞融合植物组织培养植物体细胞杂交怎样才能去除细胞壁但又不破坏细胞的生命活性呢？酶解法融合的原理及常用的融合方法？物理方法：离心、振荡、电刺激化学方法：聚乙二醇（PEG）融合可能的类型？怎样筛选杂种细胞？植物体细胞杂交成功的标志是什么？利用杂种细胞获得杂种植株所依据的原理？植物细胞具全能性酶的专一性生物膜的流动性获得的杂种植株是否能表现出人们所期望的性状？杂种植株的鉴定杂交细胞的筛选细胞融合的方法及步骤聚乙二醇PEG）化学方法电脉冲物理方法生

7、物方法细胞融合流程仙台病毒(Sendaivirus)自发融合在酶解细胞壁的过程中，有些相邻的原生质体能彼此融合形成同核体(homokaryon)，每个同核体包含2～40个核。形成的原因：由不同细胞间胞间连丝的扩展和粘连造成的。减少自发融合的措施：在用酶液处理之前，使细胞受到强烈的质壁分离药物的作用，切断胞间连丝。NaNO3处理高PH-高浓度Ga2+飞秒激光诱导融合电融合芯片空间细胞融合原生质体融合的有关名词对称杂种（双亲给杂种贡献的遗传物质均为100%）非对称杂种（双亲给杂种贡献的遗传物质不等（相对值

8、）胞质杂种（cytoplasmichybrid,Cybrid）：细胞质重组，细胞核未重组对称融合（symmetricfusion）也称标准融合（Standardfusion）非对称融合（asymmetricfusion）：融合前对一方进行处理，使其染色体丢失一部分原生质体融合的有关名词-II供-受体融合：Donor-recipientfusion体配融合（gameto-somaticfusion）（性细胞与体细胞融合）亚原生质体-原生质体融合：Subpr