微生物实验操作注意事项

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1、微生物实验注意事项   一、无菌操作要求   1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。   2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。   3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。   4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。   5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。   6.接种

2、样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。   7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。   8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。  二、无菌间使用要求   1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。   2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%

3、-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。   3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。   4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。   5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置 三、消毒灭菌要求   微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接

4、种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。  （一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法   1．灭菌前准备  （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。  （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。   2．装放  （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。  （2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。   3．设备检查  （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。  （2）检查压力表蒸气排尽时是

5、否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。  （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。   4．灭菌处理   (1)干热灭菌法：此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。     ①器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。     ②灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。     ③菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约30min，排除

6、灭菌器中的冷空气，温度升至160℃调节指示灯，维持1.5–2h。     ④灭菌完毕后或温度升温过程中，须在60℃以下才能打开箱门。  (2)手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：    ①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换）.    ②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）。    ③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）。    

7、④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）。    ⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。  (3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：   ①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。   ②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅

8、室阻气器自动排出。   ③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至   ④自然或人工降温至60℃再开门取物，