《本科hplc实验修改》PPT课件

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1、高效液相色谱法实验安排本周HPLC原理、上机创建方法下周凯氏定氮（实验六酚磺乙胺注射液的含量测定）下下周HPLC法用于阿司匹林肠溶片中游离水杨酸检查和阿司匹林含量测定HPLC在药分中的应用鉴别杂质检查含量测定、溶出度、释放度色谱法原理利用各组分理、化性质的差异，各组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，实现差速迁移，结果使组分得到分离。HPLC原理固定相流动相检测器样品HPLC原理固定相（正相、反相、离子对、手性…）流动相（酸／碱抑制、离子对…）检测器

2、（UV、MS、ELSD…）样品（前处理）注意固定相－保存的体系流动相－条件、流速（压力）检测器－仪器选择、条件选择（如检测波长等）样品－进样方法（注意满环进样）组成：贮液瓶高压泵进样器色谱柱检测器AgilentHPLC概况HPLC实验准备安装实验所需色谱柱；配制流动相（HPLC级）；流动相过滤、超声脱气；配制样品，过0.45μm微孔滤膜；六通阀进样LoadInject组成：贮液瓶高压泵进样器色谱柱检测器AgilentHPLC概况开机打开计算机，进入Windows系统；打开液相色谱仪电源，待自检完成后

3、，双击“HPLC联机”图标，化学工作站自动与1220LC连接，进入工作站；开机后的界面建立分析方法进样方式泵设置柱温箱设置波长设置采集时间“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项选中除“数据分析”外的三项，点击“确定”。在“方法注释”中加入方法的信息（如：测试方法），也可不输入，点击“确定”。选择进样源/位置：选择“手动”，点击“确定”。泵设置柱温箱设置波长设置点击“方法”菜单，选中“方法另存为”，进入以下画面：图谱采集平衡色谱柱进样，采集数据平衡色谱柱，打开泵和柱温箱，平衡10分钟后再开灯仪器准备就绪

4、，且基线平整后，可开始进样。在“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项系统等待进样数据采集中到达设定的停止时间后，数据采集自动停止；若要再次进样，则点击“单次进样”，系统等待进样后，扳动六通阀进样，开始采集数据；重复以上操作，直到待测样品分析完毕。图谱处理及报告打印点击桌面上“HPLC（脱机）”图标调用图谱谱图优化积分手动积分按钮：设定报告选择报告类型：如“简短报告”预览和打印报告设置打印机生成PDF文件冲洗系统、关机完成检测后，首先关闭检测器，用水冲洗10分钟，再用甲醇冲洗系统20分钟，同时清洗进样

5、阀。冲洗完成后，关闭泵，退出化学工作站，关闭仪器电源开关。填写仪器旁边的使用记录。