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1、S2065嘱8中华人民共和国国家标准GBIT20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法Determinationofractopamineinanimalfeeds-Highperformanceliquidchromatographicmethod2006-05-17发布2006-09-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会GB/T20189-2006前言本标准是在参阅了国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了高效液相色谱一荧光检测法。本标准由农业部和全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准负责起草单位:中国
2、农业大学动物医学院、国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人:沈建忠、张素霞、苏晓鸥、徐百志、丁双阳、沈张奇、李兰。GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法范围本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱(HPLC)方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。本方法检测限为0.5leg/g,2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡
3、是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法原理用酸性甲醇一水提取试样中莱克多巴胺，二氯甲烷和正己烷萃取净化，以2%冰乙酸一乙睛一水作为流动相，用高效液相色谱一荧光检测法分离测定。试剂和溶液除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682-1992二级水的规定。4.1乙睛:色谱纯。4.2甲醇色谱纯。4.3甲醇。4.4二氯甲烷。4.5正己烷。4.6乙酸溶液:取5mL冰乙酸加水至250mL,4.7提取液:取900mL甲醇(4.3)加水到1000mL，再加2mL浓盐酸，混匀。4.8
4、流动相:取320mL乙睛(4.1)加水到1000mL，再加20mL冰乙酸和。.87g戊烷磺酸钠(C,H=O,SNa·H2O)，混匀。4.9莱克多巴胺标准贮备液:准确称取莱克多巴胺标准品(纯度>-99%)0.1000g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容，其浓度为1000leg/mL的储备液，置4℃冰箱中，可保存3个月。4.10莱克多巴胺标准工作液:分别准确吸取一定量的标准贮备液(4.9),置于10mL容量瓶中，用2%冰乙酸稀释、定容，配制成浓度为0.01leg/mL,0.1leg/mL,0.2leg/mL,0.5pg/mL,1.0leg/mL,2.0leg/mL的标准溶液，分别进行
5、HPLC检测仪器和设备实验室常用仪器、设备及以下设备。GB/T20189-20065.1高效液相色谱仪:配荧光检测器。5.2离心机。5.3振荡器5.4玻璃具塞三角瓶:250mLe5.5微孔滤膜:0.45pm,5.6漩涡混合器。6试样制备按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过1mm孔筛，棍匀装人磨口瓶中备用。7测定步骤7.1试样提取称取一定量的试样(10.0g配合饲料，或5.0g浓缩饲料，或1.0g添加剂预混合饲料)，置于250mL玻璃具塞三角瓶中，加人100mL提取液(4.7)，振荡30min。静止20min，取上清液1mL于离心管中，于4
6、5℃下氮气吹干，加人4mL乙酸溶液(4.6)溶解，涡动30s-60s，加人2mL二氯甲烷(4.4)萃取，涡动30s,3000r/min离心10min，取上层乙酸相于另一离心管中，加人2ML正己烷(4.5),涡动30s,1000r/min离心5min，弃去上层，用。.45pm微孔有机滤膜过滤作为试样制备液，供高效液相色谱分析。7.2HPLC色谱条件色谱柱:C,，柱，长250mm，内径4.6mm,粒径5pm，或相当者。柱温:室温。流动相:见4.8,流动相流速:1.0mL/min,激发波长:226nmo发射波长:305nm,进样量:50pL,7.3HPLC测定取适量试样制备液(7.1)和相应浓
7、度的标准工作液(4.10)，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。当分析物浓度不在线性范围内时，应将分析物稀释或浓缩后再进行检测。﹃匕结果计算与表述︹匕1，试样中莱克多巴胺的含量x,以质量分数(F's/S)表示，按式(1)计算:X二竺Xn..............................(1)式中:m,-HPLC试样色谱峰对应的莱克多巴胺的质量，单位为微克(1g);m—试样质量，单位为克(9);n-稀释倍数。八八己2:
