《方法比较试验》PPT课件

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1、方法比较试验一.实验目的1.掌握本实验的实验原理；2.掌握两种不同操作方法的操作过程；3.了解血清葡萄糖测定的临床意义；4.学会应用分光光度计对各组数据进行统计处理。二.实验原理方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法（如参考方法或经典方法）作对比分析,同时测定一批标本计算出两种方法间测定结果的差值，以评价候选方法的准确度，是考核候选方法是否可被采用的重要试验。用于检测候选方法的恒定误差和比例误差，如对适当的数据进行分析也可以提供误差的性质，本实验以邻甲苯胺法作为比较方法，评价GOD-POD法测定血糖的总系统误差邻甲苯胺法测定血糖原

2、理：在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺(O-T)缩合成糖基胺，经脱水，生成希夫碱（Schiffbase），经分子重排生成蓝绿色化合物，在630nm波长处有一吸收峰，吸光度大小在一定范围内与血糖浓度成正比。邻甲苯胺+葡萄糖葡萄糖基胺希夫碱蓝绿色化合物缩合脱水三.试验试剂器材1.邻甲苯胺试剂2.GOD-POD法试剂盒3.待测血清四种含血糖浓度不同的血清：2.2mmol/L、6.7mmol/L、5.2mmol/L、3.7mmol/L.4.葡萄糖标准液（5.55mmol/L）5.其它：移液器、可见分光光度计、水浴箱等四、操作步骤1．每人随

3、机选择血糖含量高低不同的病人血清标本2份。2．将每份标本分别用两种方法各测定2次。将标本按某次序排列先测一次，第2次测定时，标本顺序全部倒过来。例如，第1次序号为1、2、3、4、5、6、7、8，第2份序号为8、7、6、5、4、3、2、1。3．计算出两法各自的测定结果具体操作如下：GOD-POD法；加入物空白管S(标)U1(测)U2(测)DDW10ul---5mmol/L(糖标)-10ul--待测血清--10ul10ul试剂（酶酚）1.5ml1.5ml1.5ml1.5ml混匀后置370C水浴15min,于505nm处比色，空白管调零，读

4、取吸光度值。O-T法(邻甲苯胺法)；加入物空白管S(标准管)U1(测)U2(测)DDW0.1ml---5mmol/L糖标-0.1ml--待测血清--0.1ml0.1ml邻甲苯胺试剂3ml3ml3ml3ml混匀后放入沸水中煮沸5min，取出置冷水中冷却3min，于630nm处比色，以空白管调零，读取吸光度值。五、结果计算测定管吸光度血清葡萄糖=×5mmol/L标准管吸光度【参考范围】空腹：3.89～6.11mmol/L；餐后2h：＜7.8mmol/L。数据处理1．设对比方法测定结果为X值，候选方法测定结果为Y值。若有n个标本，则有2n对

5、X和Y的测定结果。2．离群点检查：先计算每一标本每一方法成对结果的差值和差值的均值。以4倍的各方法差值的均值为判断限，各方法内标本的成对差值都应在限值内，说明双份测定结果符合要求。若有1点离群点，剔除。若原数据仅为40例病人标本的结果，剔除的数据应另做实验补上。有一点以上离群点，需查原因，判断是否保留数据。无法找出原因，则保留使用所有数据，不能随意剔除。若最大差异超过临床允许误差，应从仪器、试剂、方法上寻找原因，停止继续实验。3．绘制散点图：以X轴代表对比方法的测定值，Y轴代表被评价方法的测定值，图中标出斜率为1通过零点的直线。4．如

6、果实验结果线性关系良好，继续处理。如果呈非线性趋势，则需要观察是否有部分呈线性关系，寻找修正点，使余下的部分具线性趋势。但应考虑这部分是否包括了临床上有用的范围，是否需再多做一些在此范围的标本结果。如去掉非线性部分后，范围过小，无应用价值，则停止评价。5．X、Y配对值离群点检查：将每一个标本两个方法的前后两个测定值一一对应，求出第i个X与第i个Y的差值，并计算出所有标本总的平均差值，以4倍的平均差值为判断限值。所有差值都不应超出限值。若有离群点，按步骤2中的方法处理。6．统计学处理及误差分析直线回归分析：对上述n个标本，2n对（Xij

7、、Yij）数据以回归方程式y＝a+bx表示。a为回归直线在Y轴上的截距，代表恒定误差的大小；b为回归系数，即直线的斜率，代表比例误差的大小。a和b的计算公式分别为：如果两方法表示的某分析物量具相同的计量单位时，理想状态的回归式应为y＝x，即b=1，a=0。b≠1，a≠0分别表示两方法间的测定标本时的比列误差和恒定误差。相关性分析：相关系数r=求出的相关系数还应作相关系数的t检验。相关系数(r)的t检验统计学公式是：将方法比较试验的原始数据(x和y值)求得的相关系数r及例数(n)代入t检验的统计学公式，即可求出相应的tr值，再按照n-2

8、的方法计算出自由度(v)，查t值表求得t0.05(v)及t0.01(v)相应的t值，若tr＞t0.05(v)，P＜0.05，说明实测的相关系数(r)与0之间差异显著，两种测定方法的测定结果之间存在相关关系；若tr＞t0.