GB 15193.7-2003 小鼠精子畸形试验

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1、ICS07.100C53中华人民共和国国家标准GB15193.7-2003代替GB15193.7-1994小鼠精子畸形试验Micespermabnormalitytest2003-09-24发布2004-05-01实施中中华人民共和国卫生部发布国国家标准化管理委员会GB15193.7-2003月IJ舌本标准全文强制。本标准代替GB15193.7-1994《小鼠精子畸形试验》。本标准与GB15193.7-1994相比主要修改如下:—在“范围”中增加了受试物的具体内容:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、

2、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等;—在“剂量及分组”中:在高剂量组的设计方法中增加“急性毒性试验给予受试物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃容量)动物无死亡而求不出LD。时，则按以下顺序:a)10g/kg体重;b)人的可能摄人量的10。倍;或c)一次最大灌胃剂量进行设计，’:—在“操作步骤”中:增加了“受试物配制”的内容;—将“镜检”改为“阅片”，内容分列为:“阅片要求”、“精子畸形的类型”和“阅片注意事项”三部分;-—“统计方法及结果判定”分列为“数据处理”和“结果判定”自本标准实施之日起，G

3、B15193.7-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、浙江省医学科学院本标准主要起草人:徐晋康、龚幼菊、陈似兰。本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。GB15193.7-2003小鼠精子畸形试验范围本标准规定了小鼠精子畸形试验的基本技术要求。本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的遗传毒性，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品

4、工业用微生物等。2原理小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X,Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。小鼠精子畸形试验可检测环境因子对精子生成、发育的影响，而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性，故本试验可用作检测环境因子在体内对生殖细胞的致突变作用。3仪器与试剂全部试剂除注明外，均为分析纯，试验用水为蒸馏水3.1实验室常用设备。3.2生物显微镜。3.3甲醇。3.41%-2%伊红染色液:称取伊红1g,=2g,溶于100mL蒸馏水备用。4实验动物成

5、年雄性小鼠,6周~8周龄、体重25g-35g。动物购买后适应环境3天一5天。5剂量及分组受试物应设三个剂量组，最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量一般可取112LDs=，低剂量组应不表现出毒性，分别取1/4和1/8LDs作为中、低剂量。急性毒性试验给予受试物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃容量)动物无死亡而求不出LDs。时，高剂量组则按以下顺序:a)10g/kg体重;b)人的可能摄人量的10。倍;或c)一次最大灌胃剂量进行设计，再下设中、低剂量组。另设溶剂对照组和阳性对照组。每组至少有5只存活动物。阳性物可采用环磷酞胺40mg/kg体重一60mg/kg体重、甲基

6、磺酸甲醋(MMS)50mg/kg体重或丝裂霉素C(MMC)1.0mg/kg体重一1.5mg/kg体重经口或腹腔注射(首选经口)给予6操作步骤6.1受试物配制一般用蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、梭甲基纤维素等配成乳化液或悬浊液受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性6.2实验动物的处理57GB15193.7-2003经口给予，连续5天。各种致突变物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种致突变物后不同时间出现精子畸形，故有条件时，可于给受试物后第1,4,10周处死动物，检查精子形态。因为大部分化学致突变物对精原细胞后期或初级精母细

7、胞早期的生殖细胞较为敏感，故一般均是于首次给受试物后的第35天处死。6.3标本制备用颈椎脱臼法处死小鼠，取出二侧副肇，放人有适量生理盐水(约1mL)的小烧杯中或放人盛有2mL生理盐水的平皿中。用眼科剪将副肇纵向剪1刀一2刀，静止3min-5min，轻轻摇动。用四层擦镜纸或合成纤维血网袋过滤，吸滤液涂片。空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥，用1%^-2%伊红染色1h，用水轻冲，干燥。6.4阅片6.4.1阅片