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1、第14卷第1期 北方工业大学学报Vol.14No.12002年3月J.NORTHCHINAUNIV.OFTECH.Mar.2002高效液相色谱柱的稀匀浆填充方法1)2)1,2)赵继红 梁 宇 梁泽斌(1)北方工业大学基础科学学院,100041,北京石景山2)中国科学院研究生院,100039,北京) 摘 要 介绍一种改进的高效液相色谱柱的装填方法——稀匀浆装填方法.该方法使用无毒、低粘度的稀匀浆溶液和较长的合适结构的匀浆罐.在高于70MPa的压力和50mlömin匀浆输送流量下,装填5LmODS填料的反相色谱柱和SiO2硅胶的正相色谱柱都获得良好的结
2、果.柱效可达到60000öm以上;峰对称性好,SI=1～1.25;寿命长,经过500次进样柱效和峰对称性无明显变化.关键词 稀匀浆;液相色谱柱;装填方法分类号 O657.8 液相色谱法的成功得益于高效液相色谱柱平衡密度法类似.从实践结果看,用平衡粘度法制备技术的进步.现已经有多种HPLC柱的填装填色谱柱不容易得到高柱效,而且色谱峰的[3]充方法:平衡密度法、平衡粘度法、动态搅拌法对称性也差.[1,2]和匀浆法等.从溶液中悬浮颗粒的沉降理论本文提出一种改进的高效液相色谱柱填充知道,为了实现固定相的均匀填充,在填充色谱方法—稀匀浆填充方法.其根据是,颗粒沉降
3、速柱的过程中必须防止颗粒的分级沉降.防止颗度与其半径的平方成正比,被填充的固定相颗粒分级沉降的方法有:调整合适的溶剂密度,增粒度减小时,颗粒沉降的速度明显变慢.若固定加溶剂的粘度,均匀被固定相的颗粒度.使溶液相的颗粒度比较均匀,采用低密度溶剂制备匀中的颗粒密度接近于溶剂密度,颗粒物的沉降浆,当匀浆中的颗粒还没有明显分级沉降之前,速度趋向于零.这便是平衡密度法装填法的依用高压将固定相匀浆高速压入色谱柱中,迅速据,它可以避免由于颗粒度分布较大而引起在形成色谱柱床层.这样可以保证固定相填料在填充过程中的颗粒分级沉降.因此,用平衡密度柱中的均匀性,从而得到高柱效.
4、这样的装填方法填充颗粒度分布较大的色谱柱也能得到较好法要求有足够高装填压力以及装柱流量,并且的效果.但是,平衡密度法需要采用具有较大密有严格的装柱程序.度的卤代烃,卤代烃的吸附将导致色谱峰的不对称性增加.而且卤代烃的毒性较大,对操作者1 实验部分的健康极为不利.随着工艺技术的进步,固定相颗粒的均匀性已经得到保证.高密度匀浆法采主要仪器设备:VARIANLC-5000型高用四氯化碳、三氯甲烷或采用与一定比例的二效液相色谱仪,配备UV-254nm检测器,池体氧六环混合作为溶剂,装填效果与遗留问题与积8Ll.自制装柱系统及匀浆罐,色谱柱管54.6收稿日期:200
5、1—11—27第一作者简介:赵继红,讲师.研究方向:天然物质化学.©1995-2004TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved. 北方工业大学学报 第3214卷 ×150,所用的溶剂及药品均为分析纯,北京化72ö28的匀浆溶剂55ml,一同加入到三角烧瓶工厂生产.色谱固定相为天津试剂二厂生产.所中,使固定相颗粒完全湿润.将三角烧瓶置于超有溶剂在使用前均由本实验室做进一步的提纯声波发生器内作用10min,立即倒入匀浆罐中,处理.纯水由市售化学分
6、析用纯水经在酸性条加盖密封后立即打开气动高压液体泵的进气阀件下加高锰酸钾进行双重蒸镏后制得.装柱流门,启动高压泵,匀浆压力立即升高到70MPa,程如图1所示.匀浆液以30mlömin进入色谱柱管,当流出的匀浆液超过100ml后,关闭进气阀,使匀浆罐自然降到常压.静止10min,卸下柱子,安装好色谱柱柱接头,待测色谱柱性能.色谱柱评价使用的流动相为正己烷,流速1mlömin.标准样品为150ppm联苯,0.1%四氯乙烯的己烷溶液,1LlRheddyne定量阀进样.评价色谱柱寿命的样品为苯、萘、联苯、菲,进样500次.1.1 反相色谱柱的装填与色谱柱评价2 结
7、果与讨论将清洗干燥的空色谱柱管卸下入口接头,接到与匀浆罐出口相连的预柱上,用无水乙醇色谱柱的评价以柱效(理论塔板数N和塔作为匀浆顶替液.称取2.5g固定相YWG-板高度H)、不对称因子(SI)、渗透系数(KF)C18-5Lm,与含丙酮ö反向匀浆剂体积比=95ö表示.渗透系数以达西(Darcy)公式计算.5的匀浆溶剂55ml,一同加入到三角烧瓶中,2.1 反相色谱柱使固定相颗粒完全湿润.将三角烧瓶置于超声在C18柱上,样品中的苦味酸可以认为是波发生器内作用10min,立即倒入匀浆罐中,加非滞留组分,用来测定柱的死时间t0.柱效与不盖密封后立即打开气动高压液体
8、泵的进气阀对称因子(SI)以联苯色谱峰进行计算,结果列门,启动高压
