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《高效液相色谱直接衍生化法测定血清游离脂肪酸组成》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·412·JournalofClinicalandExperimentalMedicineVol.9,No.6Mar.2010高效液相色谱直接衍生化法测定血清游离脂肪酸组成论著12332刁宏斌王顺赵新峰郑晓辉马爱群(陕西省华阴市黄工集团医院陕西华阴714200;2西安交通大学第一附属医院心内科,环境与疾病相关基因教育部重点实验室,心血管离子通道病研究室陕西西安710061;3西安交通大学中草药现代化研究及工程中心陕西西安710049)【摘要】目的脂肪酸摄入和代谢在高血压的发病和进展中发挥作用,但血清游离脂肪酸(FFA)组成测定方法尚未统一,本研
2、究探讨高效液相色谱直接衍生化法测定空腹血清游离脂肪酸组成的可靠性。方法社区筛选出原发性高血压患者103例,其中肥胖患者65例,非肥胖患者38例,和血压正常个体128例,其中肥胖个体70例,非肥胖者58例,年龄35～59岁,各组饮食习惯相近。采空腹静脉血离心取上清分成两个1.5ml,用75%的乙醇60℃下除去血清中与FFA结合的白蛋白,无需常规的分离步骤,应用2-硝基苯肼盐酸盐(2-NPH·HCl)作为衍生试剂,在1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基碳化二亚胺)盐酸盐(1-EDC·HCl)的催化下,直接衍生血清中的FFA,形成不挥发的能在紫外-可见光
3、区产生吸收的脂肪酸的肼盐衍生化物,再用磷酸缓冲液酸化增加各种脂肪酸的分离度,衍生化的脂肪酸用正己烷萃取法与其它的酰肼和干扰成分分离出来,氮气吹干后甲醇定容,应用C18反向色谱柱进样30min内洗脱分析测定。结果共测定血清中主要的9种脂肪酸,从C16:0到C22:6,未鉴定的峰少于总量的1%。脂肪酸组成以个体脂肪酸浓度表示,浓度单位μmol/L。应用C17:0作内标,各脂肪酸测定的线性范围为2.6～200.0μmol/L,回收率在87.8%～120.5%之间,重复性检验变异系数<10%,相关系数为0.973～0.999,批内RSD范围为2.78%
4、～12.90%,批间RSD范围为为0.95%～15.4%。与血压正常个体比较,原发性高血压患者血清游离多不饱和脂肪酸(PUFA)水平降低(P=0.004),饱和脂肪酸(SFA)水平有增高趋势(P=0.06),P/S比值降低(P=0.000)。结论高效液相色谱直接衍生化法测定空腹血清FFA组成重复性、准确性良好,可作为血清游离脂肪酸组成常规检测的有用的工具。【关键词】高效液相色谱直接衍生化法游离脂肪酸组成High-performanceliquidchromatographicanalysisofserumfreefattyacidcomposi
5、tionsbydirectderivatizationmethod.DIAOHong-bin,WANGShun,ZHAOXin-feng,etal.TheFirstAffiliatedHospital,SchoolofMedicineofXi'anJiaotongUniversity,Xi'an,Shaanxi,China.【Abstract】ObjectiveFattyacidsintakeandmetabolismmayplayaroleinthepathogenesisofessentialhypertension,butthemetho
6、dsofdeterminingserumfreefattyacid(FFA)compositionshavenotbeenunified.Theaimofthisstudywastoinvestigatethevalidityofhighperform2anceliquidchromatograminbydirectderivatizationmethod.MethodsSubjectsagedbetween35and59yearsfromcommunitiesincluding103es2sentialhypertensivesand128n
7、ormotensiveswereselected.Fastingblood(12hours)wascollected,separatedanddispensedintotwo1.5-mlali2quots.SerumFFAwasdissolvedinethanol(75%,v/v).Withoutcommonlyusedisolationsteps,fattyacidsinserumweredirectlyderivatizedbytreatmentwith2-nitrophenylhydrazinehydrochlorideinthepres
8、enceof1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride(1-EDC·HCl)
