病理制片过程

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1、病理制片过程  在临床病理科和组织学实验室，切片是最重要的技术之一。切片的质量不好，就无法对标本进行观察。好的切片机只是整个样品制备过程中的一个环节。要制备一张好的切片，必须要将技术、知识和技巧进行完美的结合。  待切片样品的质量是非常关键的因素，而样品质量有取决于前期处理工作的准确无误（例如：固定、巨检、脱水和包埋）必须选择正确的切片机型号以及合适的钢刀或一次性刀片。切片必须根据实际应用出发，需要根据样品的类型、大小、期望的厚度认真考虑，还要兼顾操作者的便利性和舒适性。要且出高质量的切片，经验丰富的操作者也是必不可少的条件之一。操作

2、者必须懂得切片机的工作原理，能够对机器进行精细调节以达到最佳效果；并且能应对常见故障，消除一些潜在的切片问题；还可以运用恰当的切片技术，提高切片速度但不影响质量。    目前能做病理组织切片的地方很多，但要数上海舜田生物做出的病理切片相对质量上比较好，该公司有1位专业从事病理实验的老师及相关实验技术人员，积累了丰富的实验经验，所作出的切片及染色效果相当不错。1正确处理标本的重要性1.1固定  正确的固定是病理制片技术中最重要的一步，这个步骤会影响到后续的每个环节。如果固定不充分，样品的质量就会有欠缺。组织必须在选定的固定剂中浸泡足够长

3、的时间，使大分子保持固有形态。正确的固定可以防止样品在脱水剂中发生变性以及后期处理步骤对于样品造成的损害。固定不充分可能增加切片的困难，表现出过度收缩，并且会导致细胞核染色不足和/或胞核呈现“泡沫”状。1.2巨检  样品需要修切成薄片，并尽可能做到均匀，否则很难在切片机上切出好的片子。如果样品太厚以至于无法渗透充分，则必须经过再次处理才能进行切片。这样会影响样品的质量，更浪费时间。从最初的步骤开始就正确处理会使后面的工作更简单，因此在大体取材的时候多花些功夫会为以后的步骤节省大量时间和精力。备注：包埋盒塞满组织且组织过厚就无法很好的固

4、定，后续的处理步骤也会效果欠佳。1.3脱钙  为了后期进行石蜡包埋切片，骨组织需要进行脱钙，钙必须被完全去除才能确保切片的完整，并且可以防止刀具的损坏。在用酸溶液进行脱钙之前，骨组织必须经过彻底的固定，这样其中的软组织成分才能够被保护，且防止细胞核在酸的作用下被破坏，比如蛋白质水解作用。1.4组织处理（脱水）  组织经过一系列经典的处理过程，是使原本亲水性的组织最终可以用疏水性的介质进行包埋，比如石蜡，火棉胶和绝大多数树酯。备注：样品无论是处理不充分还是处理过度，都可能导致切片效果不理想。脱水机旋转升降式脱水机目前仍有一些病理工作者使

5、用，但是全自动全封闭负压/压力式脱水机逐渐占据主导地位。后者更有利于保护工作环境，更确保组织和试剂的充分作用，可以更有效缩短脱水时间。一些更先进的全自动全封闭脱水机还可以自动记录试剂的使用情况，并对试剂进行智能监控和更换。      有一点非常重要，就是处理过度对组织造成破坏绝对不亚于处理不充分造成的后果。多种因素，比如试剂的种类，处理步骤的多寡，处理时间的长短，试剂的清洁度以及加热、真空和/或压力的使用都会影响具体某个样品的处理程度。注：不同来源和不同大小的样品最好不要共用同一个处理程序，这样可以避免其中部分样品处理过度，而部分处理

6、还不充分。处理步骤：（一）脱水：  脱水的关键就是将样品置于脱水试剂中足够长的时间，其中的游离水分子被除去，但是脱水时间也不宜过长，否则结合水分子也会被除去，会导致结构的变化。而脱水时间过短致使水分还残留在样品中，就会导致包埋介质无法很好渗透入样品。但是，脱水过度会导致样品的皱缩变脆。从过度脱水的组织块上切到的切片，一旦放入水中，切片就会膨胀最后破碎。如果将整个组织块浸入水中，则组织的表面会因为水化而膨胀，这样再进行切片，虽然片子的性状会有所改善，但是形态学会发生改变，而且染色后会发生色彩偏淡，对比度较弱。最常用的脱水剂是乙醇和变性酒

7、精。甲基酒精有毒性，会破坏肝脏中的甲醛，因此不太单独使用。异丙醇是乙醇最佳替代物，常规在微波处理中使用。丁醇，剧毒，适用于较慢的组织处理过程，，而且多用在植物和动物组织。  无水酒精往往会含有水分，因此最好能检测一下试剂的纯度。可以用液体比重计来测定，也可以将几毫升酒精滴入几毫升二甲苯或甲苯，如果混合液出现混浊就表示酒精中至少含有2％的水分。（二）透明：用来进行透明的试剂和脱水剂以及包埋介质必须非常容易混合。如果组织在透明剂中时间不够，那么组织就会发软甚至呈糊状。略微延长时间并/或定期更换新鲜溶液可以避免透明不足的问题。最常用的透明试

8、剂如下：二甲苯：  目前仍被广泛使用的一种芳香烃类化合物，能够快速替换组织中的乙醇。在正确的脱水步骤后，芳香烃能够改变样品的折射率并使组织变透明。当有水分存在的时候，二甲苯会变混浊，这时必须更换。作用时间过长会导致组织变