细胞工程 实验技术

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1、CELecture1细胞工程实验室基本实验技术授课教师:谢浩10/20051WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞品种改良，生物制品(如抗体制备)，医学用途，…培养，改造细胞工程实验室的设置和运行都是为细胞工程服务的。10/20052WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞培养的基本概念细胞培养的基本条件细胞培养的基本技术10/20053WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.CE1-1细胞培养的基本概念10/20054WuhanUniversi

2、tyofScienceandTechnologyXieH.什么是细胞/组织培养？体外细胞培养的优点和缺点培养细胞生长的基本条件10/20055WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.什么是细胞/组织培养？细胞的体外繁殖Propagationofcellsoutsidetheorganism包括动物组织培养和植物组织培养Tissuecultureinvolvesbothplantandanimalcells通过组织培养可以获得克隆Tissuecultureproducesclones,inwhichallproductcellshavethesame

3、genotype(unlessaffectedbymutationduringculture)10/20056WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.体外细胞培养的优点细胞株和细胞系的遗传单一性可由单细胞决定Singlewelldefinedcelltype培养条件可控制，较易操作Controlledconditions，alsoeasytomanipulate生物材料操作方便Superbaccess可代替动物试验AlternativetoanimaltestingModelsystemfordiscoveryofphysiologicalprin

4、ciplesChecklateronthesmallernumberofanimals可以获得大量的细胞Largequantitiesofcellscanbeobtained10/20057WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.体外细胞培养的缺点细胞培养同动物培养完全不一样NotatalllikeananimalIncellculturescellsarenolongerorganizedintotissuesMonolayerisnothinglikea3Dtissue细胞培养环境同体内环境不同Environmentisnotlikeinviv

5、oECMscaffolding受血清，血浆等培养条件的影响Effectsofserum,plasma,etc.“Tissueculturecanbeapowerfultechniqueifconductedproperlyandagreatwasteoftimeandmoneywhendonesloppily”BerniceMartin,Ph.D.10/20058WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞的营养需要细胞的生存环境温度:37℃，O2CO2:5%，CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-pH:7.2-7.4渗透压无污染无毒培养

6、细胞生长的条件10/20059WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.CE1-2细胞培养的设备10/200510WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.无菌：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素细胞生长：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清细胞检测：倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器细胞保存：液氮罐10/200511WuhanUniversityofScienceandTec

7、hnologyXieH.无菌设备：净化工作室------我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准-------洁净度级别尘粒最大允许数/立方米尘粒最大允许数≥0.5um≥5um浮游菌/立方沉降菌/皿1003,50005110,000350,0002,0001003100,0003,500,00020,00050010300,00010,500,00060,000NA1510/200512Wuhan