中国预防兽医学报论文模板

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1、柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA在乳酸乳球菌中的克隆与表达张雪莉1，荣泽秦2，金崔尚3，何庆2，刘尚2（1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京100089；2.中国农业大学动物医学院，北京100094；3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001)摘要：用PCR技术特异扩增了柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA序列，克隆至质粒pMD18-T中，获得重组质粒pMD18-T-TA4，采用KpnI/SacI双酶切法及PCR确认正确后，将TA4基因cDNA目的片段亚克隆到乳酸乳球菌表达

2、载体pMG36n中，电穿孔法转化乳酸乳球菌LM0230，获得重组质粒pMG36n-TA4，采用KpnI/SacI双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确。获得TA4乳酸乳球菌表达株，经SDS-PAGE电泳分析，结果表明表达产物与预期大小的TA4蛋白分子量一致。关键词：柔嫩艾美耳球虫；TA4抗原基因cDNA；乳酸乳球菌；克隆与表达CloningandexpressionofTA4antigenfromEimeriatenellainLactococcuslactisZHANGLi1,QINZe-r

3、ong2,CUIShang-jin3,HEZhao-qing2,LIUShang-gao2(1.BeijingMunicipalAcademyofAgriculture&Forestry,Beijing100089,China;2.ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China;3.HarbinVeterinaryResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin100051,C

4、hina)Abstract:TA4antigencDNAofE.tenellawasamplifiedbyPCRandclonedintoavectorpMD18-T.ThepositiveplasmidcontainedTA4antigencDNAwasdetermindedbyrestrictionenzymeanalysisandPCR.TheplasmidpMD18-T-TA4andthevectorpMG36nwerebothdigestedbySacIandKpnI.ThecDNAenc

5、odingTA4antigenwassubclonedintopMG36nandtransferredintoLactococcuslactisLM0230byelectroporation.ItprovedthatthepositiverecombinantplasmidpMG36n-TA4containedcDNAencodingTA4antigenbyrestrictionenzymeanalysisandsequencedetermination.Inthepositivetransform

6、ants,theTA4antigenwasexpressedasafusionproteininLactococcuslactisLM0230,whichwasverifiedbySDS-PAGE.Keywords:Eimeriatenella;TA4Antigen;Lactococcuslactis;cloningandexpression球虫子孢子表面的一种抗原TA4为25Ku的糖蛋白，是由8Ku和17Ku两条多肽通过二硫键连接而成的。在孢子化开始后16ｈ～24ｈ合成[1]。Files[2]等利

7、用一段标记的寡聚核苷酸序列作探针，首先从基因文库中筛选出了TA4抗原的基因（ta4），其后Brothers[3]利用ta4基因片段克隆出了该基因的全长cDNA，并将此在大肠杆菌中直接表达或作为β-半乳糖苷酶基因融合蛋白的一部分表达。近年来乳酸菌分子生物学进展迅速，探索一些有价值的基因在乳酸菌中克隆和表达已成为乳酸菌分子遗传学研究的热点[4~6]。因此，乳酸菌基因工程菌在功能食品、医疗保健及微生态制剂、人工口服疫苗等领域的应用均具有诱人的前景[5]。本研究主要采用分子克隆技术，进行TA4抗原cDNA在

8、乳球菌中克隆和表达的基础性工作，构建TA4抗原的cDNA重组表达质粒，并用电穿孔法导入乳球菌中，筛选到能表达TA4的工程乳酸菌，将外源基因表达产物与有益菌集为一体，为球虫基因疫苗发展的新途径奠定基础。收稿日期：2005-04-13基金项目：本课题为国家自然科学基金资助项目（30070571）作者简介：张雪莉（1973-），女，汉族，新疆乌鲁木齐人，博士，助理研究员，主要从事畜禽传染病的分子防制.51材料和方法1.1菌株和质粒乳酸乳球菌（Lactococcuslacti