中国兽医学报20

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1、中国兽医学报2009年1月第29卷第1期ChinJVetSciJan．2009Vo1．29No．141双重实时荧光PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立及应用王伟伟，王君玮，李林，赵永刚，赵云玲，邓俊良，王志亮H(1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛266032；2．四川农业大学动物科技学院，四川I雅安625014)摘要：根据GenBank上公布的MRP与CPS2J的开放性阅读框保守序列，运用BEACONDesigener2．0软件设计和合成了2对引物和其相应的荧光探针，优化各个反应物的浓度和实时荧光PCR循环程序，建立从组织中直接检测2型链球茵主要

2、毒力因子MRP与CPS2J的实时荧光PCR方法。双重实时荧光PCR检测2型猪链球菌方法能够从病料中直接检测2型猪链球菌并可以检测出该菌的主要毒力基因MRP，运用该方法可以最低检测到24CFU／mL2型猪链球菌，并且与其他血清型链球菌和其他病原菌无交叉反应，特异性良好。通过对8个样品在3个不同时间的检测，结果显示该方法的稳定性和重复性均很好。关键词：猪链球菌2型；双重实时荧光PCR；MRP；CPS2J中图分类号：$852．611文献标识码：A文章编号：1005—4545(2009)01—0041—04Establishmenntofdualreal-ti

3、mePCRfordetectionoftype2Strepoccoussuisandit'sapplicationWANGWei—wei，WANGJun-wei，LIlin，ZHAOYong—gang，ZHAOYun—ling，DENGJun—li—ang．WANGZhi—liang(1．NationalDiagnosticCenterforExoticAnimalDisease~NationalAnimalQuarantineInstituteofMinistryofAgriculture，Qingdao，Shandong266042，China；2

4、．CollegeofAnimalScienceandTechnology，SichuanAgriculturalUniversity，SichuanYaan，635014．China)Abstract：OnthebasisoftheobtainedcorssequencesofopenreadingframesofMRPandCPS2J，whichwerepublishedinGenBank，wedesigenedtWOpairsofprimersandit'sfluorescentspecificprobebythesoftwareofBEA—CON

5、Desigener2．0．Byoptimizedtheconcentrationsofallactorsandtheloopprogram，wesetupthemethodtOde—tectthemainvirulencefactorsMRP、CPS2Jinthetype2Strepoccoussuisfromhistologicalmateria1．Dualreal—timePCRfordetectionoftype2Strepoccoussuiscandetectthetype2Strepoccoussuisfromtissuesenabletoj

6、udgementofthetype2StrepoccoussuisvirulencegeneMRP，bythemethodwedetected24CFU／mltype2Strepoccoussuis，andtherewasnoconsensualreactionbetweenotherserologicaltype．Wedetectedeightsamplesinthreedifferentpe—riods．Thismethodwasprovedtohaveagoodstabilityandreproduc．h．1ity．Keywords：type2S

7、trepoccoussuis；dualreal-timePCR；MRP；CPS2J*Correspondingauthor，E-mail：ZLWanglllyahoo．corn．cn猪链球菌2型是一种重要的人兽共患病病原，1998—1999年连续2年夏季在江苏省南通地区猪它可以引起猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎以及急群大面积暴发流行2型猪链球菌病，猪群的发病率性死亡，更可导致生猪从业人员感染和死亡，该病已和死亡率均在509／6左右，并导致特定人群感染致成为严重影响各国养猪业发展的一种重要疫病。黄死；2005年夏季在四川省资阳、内江等地更是引发毓茂等[1

8、于1991年在广东省首次证实此病在我国了大规模的公共卫生突发事件，此疫共造成637头的存在，后