一组PCR特异性鉴别引物及其鉴别滇重楼的方法

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1、说明书摘要本发明涉及一组PCR特异性鉴别引物及其鉴别滇重楼的方法，属于分子标记技术领域，所述的一组PCR特异性鉴别引物的核苷酸序列分别为CL-F：5’—CGCGTACAACGAAACCATGCTGGGC—3’；CL-R：5’—GAAGAGTGGGATGCCAACTGAGACC—3’。采用PCR特异性鉴别引物鉴别滇重楼的方法步骤为：1）提取待测样品的基因组DNA；2）以步骤1）中提取的基因组DNA为模板，使用特异性PCR鉴别引物对其进行PCR扩增；3）对步骤2）的扩增产物进行电泳检测，在130bp处检测出条带的待鉴定样品

2、鉴定为滇重楼，在130bp处未检测出条带的待鉴定样品为其他植物材料。本发明只需要进行PCR，然后取PCR产物进行凝胶电泳，根据电泳条带的大小及有无即可区分滇重楼及其混淆品，具有操作简单、快速的特点，在药材真伪品快速检测方面具有独特的优势。1摘要附图1权利要求书1．一组PCR特异性鉴别引物，其特征在于：所述的一组PCR特异性鉴别引物为：CL-F：5’—CGCGTACAACGAAACCATGCTGGGC—3’；CL-R：5’—GAAGAGTGGGATGCCAACTGAGACC—3’。2．根据权利要求1所述的一组PCR特异性

3、鉴别引物，其特征在于：其构建的具体步骤为：1）提取滇重楼及其混淆品的基因组DNA；2）以步骤1）提取的基因组DNA为模板，使用通用引物ITS2对其进行PCR扩增；3）对步骤2）的PCR扩增产物进行测序；4）使用BioEdit软件对步骤3）的测序结果进行序列分析，校对和对比，找出滇重楼特有的变异位点；5）利用primerpremier5.0软件设计一组特异性PCR鉴别引物。3．根据权利要求2所述的一组PCR特异性鉴别引物，其特征在于：步骤2）中，PCR反应体系总体积为25μL，反应体系包括20mM10×PCRTaqbuf

4、fer（Mg2+plus）、10mMdNTP、上下游引物各10μM、1UDNATaq聚合酶、1μLDNA模板、ddH2O补足25μL。4．根据权利要求2所述的一组PCR特异性鉴别引物，其特征在于：步骤2）中，PCR反应体系的热循环程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，56℃退火45s，72℃延伸1min，72℃延伸10min35个循环。5．一种采用PCR特异性鉴别引物鉴别滇重楼的方法，其特征在于：具体步骤为：1）提取待测样品的基因组DNA；2权利要求书2）以步骤1）中提取的基因组DNA为模板，使用特异性PCR

5、鉴别引物对其进行PCR扩增；3）对步骤2）的扩增产物进行电泳检测，在130bp处检测出条带的待鉴定样品鉴定为滇重楼，在130bp处未检测出条带的待鉴定样品为其他植物材料。6．根据权利要求5所述的一种采用PCR特异性鉴别引物鉴别滇重楼的方法，其特征在于：步骤2）中，特异性PCR反应体系的热循环程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，56℃退火45s，72℃延伸1min，72℃延伸10min35个循环。2说明书一组PCR特异性鉴别引物及其鉴别滇重楼的方法技术领域本发明属于分子标记技术领域，具体地说，涉及一组PCR特

6、异性鉴别引物及其鉴别滇重楼的方法。背景技术重楼属(ParisL.)是百合科多年生草本植物,《中国植物志》英文版中记载重楼属植物全世界约有39个物种,主要分布在欧亚大陆的热带至温带地区。该属植物在国内多做药用,其中滇重楼(Parispolyphyllavar.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.)及华重楼[P.polyphyllavar.chinensis(Franch.)Hara.]收载于2005年版《中国药典》,是云南白药等多种中药的重要原料之一。然而重楼植物分类复杂,由于不同类群的特征性状

7、交叉重叠，各类型界限模糊不清，给重楼药用植物鉴定带来困难。近年来，随着对重楼需求量的增大，野生重楼资源急剧减少，采集野生滇重楼不能满足市场需求,更破坏了生态环境和滇重楼资源，寻找鉴定重楼药材的有效方法迫在眉睫。有关重楼植物鉴定，已有形态学、细胞学(包括核型和染色体多态性)和RAPD、AFLP等DNA分子标记方面的研究，这些研究都为重楼属药用植物的鉴定提供了依据。而位点PCR技术直接利用DNA序列进行物种的鉴定，具有独一无二的可重复性，为药用植物鉴定带来了新的机遇。目前，运用DNA分子标记技术对重楼属植物进行鉴定上，有学

8、者运用过对滇重楼（P.polyphyllavar.yunnanensis）、南重楼（Parisvietnamensis）与华重楼（P.polyphyllavar.chinensis）等11个物种，比较几种片段各序列扩增和测序效率、种内和种间变异(朱英杰,陈士林,姚辉,谭睿,宋经元,罗焜,鲁静.重楼属药用植物DNA条形码鉴定研究[J