实用pcr流程表

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1、临床PCR检验流程记录表2008.10检验日期：检验项目：扩增仪中保存文件名使用说明：①严格按单一流向进行实验，即试剂准备区→标本制备区→扩增区，严禁逆向移动。本记录表的流向亦遵循此流程；②各项工作执行后在相应项目前的方框内打“√”；③本记录表最后归档保存在PCR实验室扩增区的专用文件夹中，以备查找。④Lightcycle扩增仪中结果保存于D盘对应实验日期的文件夹中，如2008年9月的结果保存于“D：20089”中，每月底将当月资料备份于软盘中，保存2年。实验前准备□试剂在有效期内□扩增仪、加样器、金属浴、温湿度计等仪

2、器在校准有效期内（校准之日起1年）□生物安全柜的滤膜在使用有效期内□离心管、带滤芯吸头已经过质检合格□各区按消毒液配制SOP配制500mg/L含氯消毒液、2000mg/L含氯消毒液和70%酒精，即用即配。□打开通风设备操作者试剂准备区实验前：□更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套□实验台面清洁（500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭）冰箱温度：冷藏室（2～8℃）℃；冷冻室（-20±2℃）℃实验室温度℃（允许范围：15～30℃）；相对湿度：（允许范围：30%～70%）PCR试剂来源：试剂厂家：口深圳匹基生物工程有限公司批号：

3、检验项目：HBV-DNA本次实验用量：人份；剩余量：人份检验项目：HCV-RNA本次实验用量：人份；剩余量：人份其他有关试剂配制：仪器设备使用：离心机：□正常□不正常；振荡器：□正常□不正常；生物安全柜：口正常口不正常实验后：□按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外线照射30分钟以上。□按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。操作者检验日期：检验项目：样本处理区实验前：□更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套□实验台面清洁（500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭）冰箱温度：冷藏室（2～8℃）℃

4、；冷冻室（-20±2℃）℃实验室温度℃（允许范围：15～30℃）；相对湿度：（允许范围：30%～70%）HBV-DNA阳性室内质控物来源：浓度及批号：扩增位置：HBV-DNA阴性室内质控物来源：批号：扩增位置：HCV-RNA阳性室内质控物来源：浓度及批号：扩增位置：HCV-RNA阴性室内质控物来源：批号：扩增位置：所处理的HBV-DNA标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：1917252101826311192741220285132129614223071523318162432所处理的HCV-RNA标本（对应标本接收

5、的唯一编号）及拟扩增位置：1917252101826311192741220285132129614223071523318162432核酸提取及加样过程：□按乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR操作程序SOP进行。□按丙型肝炎病毒RNA荧光定量PCR操作程序SOP进行。仪器设备使用：生物安全柜：□正常□不正常；恒温金属浴：℃；离心机：□正常□不正常；振荡器：□正常□不正常；低温离心机：制冷：□正常□不正常；离心：□正常□不正常实验后：□按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外线照射30分钟以上。□按

6、实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。口使用后标本冷冻保存3个月，以备复查。操作者检验日期：检验项目：扩增及产物分析区实验前：□更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套□实验台面清洁（500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭）实验室温度℃（允许范围：15～30℃）；相对湿度：（允许范围：30%～70%）LightCycler扩增仪操作：□开机自检及运行正常；□按LightCycler操作使用SOP进行编程、参数设定HBV-DNA标准曲线计算值：Slope值：Intercept值：r值：室内质控结果：阴性质控物结果：；阳性质控物结

7、果：口填写室内质控记录、质控图；　是否失控：口否　口是　HCV-RNA标准曲线计算值：Slope值：Intercept值：r值：室内质控结果：阴性质控物结果：；阳性质控物结果：口填写室内质控记录、质控图；　是否失控：口否　口是失控原因及分析：　（失控判断标准及原因分析按室内质控SOP进行）实验结果：见所附扩增仪打印结果实验结果有效性判断：□有效□无效（依据实验结果有效性判断SOP进行）实验后：□按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外线照射30分钟以上。□按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。操

8、作者1.操作步骤：1.2.1取n个1.5ml的灭菌离心管，作好标记。（n=样本数+1管HCV阴性对照+1管HCV强阳性对照+1管HCV临界阳性对照）1.2.2向上述离心管中分别加入25ul蛋白酶溶液。1.2.3分别加入待测样本、HCV阴性对照、HCV临界阳性对照和HCV强阳性