达亚美操作程序 (1)

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1、ABO正/反定型和RhD血型检测卡操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g×10min，以免纤维蛋白物残余干扰反应结果。样本准备：5%样本红细胞制备：压积红细胞25μl或全血50μl悬浮于0.5ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：ABO正/反定型和RhD血型检测卡2号稀释液标准红细胞A1和B操作步骤：1)取50μlA1,B标准细胞（0.8%）分别加入A1,B管中。2)取50μl血清或血浆加入A1,B管中。3)取10μl5%样本红细胞加入

2、A,B,D,Ctl管中。4)离心10分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（＋）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（－）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、ABO血型判断血型抗原与抗血清反应与A1、B细胞反应抗-A抗-BA1BAA++++－－+/++++BB－+++++/++++－ABA，B，AB++++++++－－0H－－+/+++++/++++3、RhD血型判断+++～++++±～++阴性RhD阳性RhD弱

3、阳性RhD阴性抗体筛选操作程序操作规程（间接抗人球法IAT）样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g×10min，以免纤维蛋白物残余干扰反应结果。配套试剂：低离子抗人球蛋白卡2号稀释液抗体筛选标准红细胞抗原格局图操作步骤：1)取50μl试剂红细胞悬液至低离子/抗人球卡各微管中。2)取25μl待检血浆/血清加入各管中。3)37℃孵育15min。4)离心10分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（＋）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中

4、。阴性（－）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、抗体筛选结果：阴性表示被检血浆/血清未发现不规则抗体；阳性表示有不规则抗体。将结果与试剂红细胞的抗原格局图比对，初步确定抗体类型，并进一步检测以鉴定抗体。交叉配血操作程序操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g×10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8％样本红细胞制备：取10μl压积红细

5、胞至1ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：低离子抗人球蛋白卡2号稀释液操作步骤：1)取0.8％供体红细胞悬液50μl至低离子/抗人球卡主侧管中；取0.8％病人红细胞悬液50μl至低离子/抗人球卡次侧管中。2)取25μl病人血浆/血清加入主侧管中；取25μl供体血浆/血清加入次侧管中。3)37℃孵育15min。4)离心10分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（＋）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（－）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶

6、解，作为阳性结果对待。2、交叉配血结果：阴性表示配血成功；阳性表示配血不成功，需进一步检测。新生儿溶血症的“三项试验”操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g×10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8％样本红细胞制备：取10μl压积红细胞至1ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：低离子/抗人球卡，2号稀释液，A1、B标准红细胞，抗体筛选标准红细胞，DiaCidel洗涤液（用前以蒸馏水1：10稀释），DiaCidel放散液

7、，DiaCidel缓冲液操作步骤：红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)1．取新生儿脐带血，用达亚美2号稀释液（ID-Diluent2）配0.8%的红细胞悬液。2．在低离子/抗人球卡中加入50µl上述红细胞悬液。3．离心10分钟，判读结果。记录。游离试验(IAT)1．取新生儿脐带血，离心，取血浆。2．在低离子/抗人球卡中分别加入50µl0.8%的标准红细胞。3．各孔均加入25µl新生儿脐带血清。4．37℃孵育15分钟，离心10分钟。判读结果。记录。释放试验(IAT)1用等渗生理盐水洗涤红细胞一次，至少需要压积红细胞1

8、ml。2用DiaCidel洗涤液（工作浓度）洗红细胞4次。3最后一次洗涤后，小心倾除上清液。可另用试管保留部分上清液，以检测是否存在不规则抗体。4将1mlDiaCidel放散液加至红细胞中，充分混匀。5立即离心1分钟，转速900×g（3000rpm）。6将放散液移入干净试管。7加5滴（250μl）DiaCidel缓冲液于放散液中，混匀。若有兰色出现，表明达到中性，即pH6.5—7.5；