《切片技术》PPT课件

《《切片技术》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、显微技术(Ⅰ光镜)江苏大学基础医学与医学技术学院组织胚胎学系卢小东1meter100mm10mm1mm100um10um1um100nm10nm1nm0.1nmNakedEyeLightMicroscopeElectronMicroscopeOrganismsOrgansCells(20u)Nucleus(2u)Bacteria(0.5u)OrganellesVirusesMacromoleculesAtoms...Resolvingpower分辨率：光镜：0.2µm电镜：0.1nm显微长度单位millimeter(mm)

2、=10-3metermicrometer(µm)=10-6meternanometer(nm)=10-9meter显微镜技术:光镜：lightmicroscopic,LM电镜：electronicmicroscopic,EM透射电镜（transmissionelectronmicroscope,TEM）：观察细胞内部结构扫描电镜（scanningelectronmicroscope,SEM)：观察组织或细胞表面的立体结构组织学的研究技术光学显微镜技术显微镜17th18th光学显微镜技术显微镜18/19th19thEyePi

3、ecesObjectivesStageLightsourceVol.controlOn-offButtonControlsFinefocuscontrolCoarsefocuscontrol10X4低倍观察10X10中倍观察10X40高倍观察10X100油镜普通生物显微镜的放大倍数光学显微镜原理荧光显微镜是用以观察细胞及组织内荧光物质的分布。相差倒置显微镜是用以观察培养细胞。一般光镜不易分辨无色透明的活细胞，需用相差显微镜（phasecontrstmicroscope）才能观察。相差显微镜可将厚细胞不同或度及细胞内各种结构

4、对光产生的不同折射，转换为光密度差异（明暗差），从而使镜下结果反差明显，影像清晰。细胞培养光镜标本制备？？？光学显微镜技术常见标本制备：HE染色，石蜡切片特点：石蜡切片是使石蜡充分浸入组织，组织块变硬，有利于切薄，制作的切片能完好地保存组织原有的结构，透明度好，并可长期保存，有利于显微镜下观察组织图像。这种方法包括以下几个步骤：步骤取材固定：福尔马林脱水：酒精透明：二甲苯包埋：石蜡切片：切片机染色：HE取材根据教学和科研的具体要求确定材料、部位和方法材料新鲜组织块的大小：使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部。如制作病理外检、

5、科研切片，取0.1～0.2cm即可勿挤压组织块保持组织原有形态、保持组织清洁固定为了阻止组织细胞的死亡后变化，防止自溶与腐败，保持组织内细胞原有的形态结构，切取组织块后应立即进入固定液，常用的固定方法有：小块组织固定法：标本：固定液为1：4～20；最常用的方法，但组织块不易过大过厚，最好置入冰箱冷藏室内固定，冷藏固定时间适当延长，特别是组织化学实验用的材料，冷藏固定效果会更好。注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，

6、经血管分支达整个组织和全身，从而得到充分的固定的目的。固定液：单纯固定液（10%甲醛固定液和95`%乙醇）混合固定液：酒精-甲醛固定液（95%酒精9份、40%的甲醛1份）；Zenken氏液（重铬酸钾2.5g，升汞5.0g，蒸馏水100ml,冰醋酸5ml）；Bouin氏液（苦味酸饱和水溶液25ml,40%甲醛25ml，冰醋酸5ml）脱水与透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块内的水分置换出来，这一过程叫做脱水。脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。丙

7、酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。但因其沸点低，脱水力强，加温至沸点时在短时间内可脱水彻底，故病理外检快速石蜡切片时可用丙酮脱水剂。乙醇、丙酮等不溶于石蜡，还要经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程，此过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、冬青油等。Dehydration脱水透明浸蜡已透明的组织移入已熔化的石蜡中，使蜡充分浸入组织内，此过程称为浸蜡又称透蜡。浸蜡时应注意以下几点：浸蜡熔点：石蜡分为软石蜡与硬石蜡两种，熔点为42～54℃一般称为软

8、蜡，熔点为56～62℃称为硬蜡。浸蜡时，应先经软蜡再经硬蜡，（常用的浸蜡熔点为52～54℃、54～56℃、56～58℃Ⅲ级浸蜡），使组织中含有的透明剂完全去尽。浸蜡温度：浸蜡的温度应高于熔点的2～5℃为宜，温度过高可致组织过度收缩或变脆，如在温箱内浸蜡，要将温度控制在60～65℃的范围。浸蜡时间：可根据