《分子标记辅助选择》PPT课件

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1、第五章分子标记遗传标记分子标记分子标记在家畜育种的应用近10年来，分子遗传学和分子生物学有了突飞猛进的发展，主要表现在：大量DNA水平上的分子遗传标记及其检测技术；DNA序列测定技术；转基因技术；核移植（体细胞克隆）技术；大量的分子标记提供的信息可用于：QTL的检测；标记辅助选择；标记辅助基因导入；标记辅助杂种优势利用；标记资源保存；研究品种起源与发展；亲子鉴定；等等。研究最多第一节遗传标记的概念概念：遗传标记是指那些可准确鉴别的能反映个体特异性的遗传特征，是一类与目标基因紧密连锁，易于从表现型上直观鉴别的等位基因

2、。通过对标记性状的直接选择，从而实现对目标基因的间接地选择。理想的标记应具备：☆高多态性，多态是指标记在群体中有多种基因型，多态程度高，个体之间在标记上就能表现出差异，所提供的信息也就越多；☆数量多，而且均匀地覆盖整个基因组；☆对它的测定不受年龄、性别、环境等因素的限制；☆共显性，能够准确判别所有可能的基因型。传统的标记有：1、形态学标记：主要指一些具有鲜明外部特征的质量性状，并可以通过表型来推断其基因型，如毛色、有无犄角等；2、细胞学标记：是指染色体形态、数目和结构的变异，用具有异常染色体的个体与具有正常染色体的

3、个体杂交或用染色体替换等手段，可对一些基因进行定位；3、生化标记：是在血液或乳中的蛋白质（包括酶）的多态性，这些多态性可通过免疫反应或电泳技术反映出来，并由此判定其基因型，如血型抗原、血液蛋白、乳蛋白、同工酶等。传统标记的主要缺陷：多态性和数量有限。第二节分子标记（molecularmarker）Botstein限制性片段长度的多型性RFLP(RestrictionFragmentLengthPolymorphism)VNTR(variousnumberoftandemrepeats)1985K.B.Mullis基

4、于聚合酶链式反应的多型性PCR-basedpolymorphsm1996E.Lander单核苷酸多型性SNP(singlenucleotidepolymorphism)全基因DNA测序是揭示DNA多型性的最清晰，最全面的方法，是研究基因功能，揭示生命奥秘的重要途径。开发RFLP及以PCR为基础的分子标记技术，对目的基因进行分子标记的精细定位，并将分子标记应用于遗传改良的辅助选择中，仍是分子技术育种和现代农业体系中十分重要与有效的领域。分子标记具有明显的优越性：直接以DNA的形式表现，在各个组织、各发育时期均可检测，

5、不受季节、环境限制，不存在是否表达的问题；数量多，遍及整个基因组，检测位点近乎无限；多态性高，自然存在着许多等位变异，不需要专门创造特殊的遗传材料；表现为中性，即不影响目标形状的表达，与不良性状无必然的连锁；共显性。分子标记是传统遗传标记的补充和发展。RFLPRestrictionFragmentLengthPolymorphisms限制性酶切片段长度多态性，是指用限制性内切酶酶切不同个体的基因组DNA后，所得的含有同源序列的酶切片段在长度上所存在的差异。差异的产生是由于DNA序列中个别碱基的变异而造成某个限制性内

6、切酶酶切位点的产生或丢失。最早开发的DNA标记。特点:无表型效应;共显性—双亲的两个以上分子量不同的多态性片段均在F1中表现;种族特异性;标记范围遍及全基因组;但所需DNA量大,检测步骤繁琐,检测时间相对较长（一般需10-14天）,耗费成本高,需利用放射性同位素。可将RFLP标记转化为PCR-RFLP标记CAPs又称PCR-RFLP即利用特定引物进行PCR扩增，将PCR产物用限制性内切酶酶切，检测酶切片段大小差异，观察其多态性。RAPDrandomlyamplifiedpolymorphicDNA---随机扩增多态

7、性DNA是基于PCR技术的分子标记，它是用随机序列组成的寡核苷酸作为引物，通过专门的PCR反应扩增所获得的长度不同的多态性DNA片段。RAPD原理图遵循孟德尔方式遗传；随机引物分子已成为商品，数量几乎无限；一次反应可检测1-10位点；以显性为主，不受环境影响，无上位性；成本低，DNA用量少，检测时间短（一般10小时），灵敏度高，重复性差。AFLPAmplifiedFragmentLengthPolymorphism----扩增片段长度多态性是指通过特定引物和DNA多聚酶链式反应复制并扩增不同个体基因组DNA模板后，

8、所得扩增片段在长度上的差异。不同个体的DNA序列存在差异，在复制特定的DNA序列时所需的引物也可能不同，同一引物可诱导某一个体的DNA片段得以复制，而在另一个体中就可能不能诱导。AFLP技术结合了RFLP与RAPD的特点，揭示的遗传多型性十分丰富，一次反应可检测数十条，AFLP为共显性标记，成为目前较为经济，有效，快速的一种分子标记技术。AFLP分析步骤:选