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《农杆菌介导的基因敲除技术在丝状真菌基因功能研究中的应用_李彩红》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、棉花学报CottonScience2013，25（3）：262~268农杆菌介导的基因敲除技术在丝状真菌基因功能研究中的应用*李彩红，李志芳，冯自力，赵丽红，师勇强，王玲飞，刘义杰，朱荷琴（棉花生物学国家重点实验室/中国农业科学院棉花研究所，河南安阳455000）摘要：近年来不少丝状真菌全基因组测序已经完成或正在进行，基因功能研究已成为真菌研究的一个热点。利用反向遗传学的方法敲除基因是研究丝状真菌功能基因的常用方法之一，基因敲除是通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，可以敲除整个基因，或者将一个基因替换成该
2、基因的等位基因，或者用一个调控启动子替换一个基因正常的启动子，从而精细地定点修饰和改造基因DNA片段的技术。本文简述了利用农杆菌介导的遗传转化方法（ATMT）进行基因敲除的技术在丝状真菌基因组功能研究中的应用。关键词：农杆菌介导的遗传转化；基因敲除；同源重组；丝状真菌；功能研究中图分类号：S435.621文献标志码：A文章编号：1002-7807(2013)03-0262-07ApplicationsofGeneKnockoutbyATMTinFilamentousFungusFunctionalGenomics
3、LICai-hong,LIZhi-fang,FENGZi-li,ZHAOLi-hong,SHIYong-qiang,WANGLing-fei,LIUYi-jie,ZHU*He-qin(StateKeyLaboratoryofCottonBiology/InstituteofCottonResearch,ChineseAcademyofAgricultureSciences,Anyang,Henan455000,China)Abstract:Withmanyfungalgenomeshavingbeenorcurr
4、entlybeingsequenced,identificationofgenefunctionhasbecomeahottopicinfungalresearch.Geneknockoutisoneofseveraltechniquesusedinstudiesofgenefunction.Themethodcanbeusedtodeleteentiregenes,replaceanallelewithanother,exchangeagivengene'snormalpromoterforaregulatab
5、leone,andlabelgeneswithepitopetagsorfluorescentproteins.Inthispaper,wereviewapplicationsofgeneknockoutviaAgrobacteriumtume-faciens-mediatedtransformation(ATMT)infilamentousfungusfunctionalgenomics.Keywords:ATMT;geneknockout;homologousrecombination(HR);filamen
6、tousfungus;functionalidentification丝状真菌占真菌界中很大的比重，在工业、(Aspergillusnidulans)和粗糙链孢霉(Neurospora农业、医药及基础生物学研究中具有重要作用。crassa)基因组相对简单、可操作性强，可作为“模[4]一些重要的工业菌株用于生产酶、有机酸等物式”种用于真核生物的一些生物学特性研究。随[1]质，如黑曲霉、绿色木霉等。一些与农业生产有着大量丝状真菌基因组序列的测定以及高效分着重要的关系，既是重要农作物上的病原菌，如子研究手段的发展，以基
7、因功能鉴定为目标的功稻瘟病菌、棉花黄萎病菌等；又是生防真菌，具有能基因组学已经成为目前生命科学领域研究的[2]防治植物病虫害的功能，如绿僵菌、木霉菌等。热点。目前已有一些方法用于丝状真菌基因功能[5-6][7-8]另一些丝状真菌在医药上有着举足轻重的作用，的研究，如转座子标签法、基因敲除技术、[9-10][11-12][13]如来源于海洋的丝状真菌、一种新型的可以产生RNA干扰、超表达及酵母杂交系统等。抑制癌细胞扩散物质的灰绿曲霉（Aspergillus其中基因敲除技术能够有效和特异性地抑制目[3]glaucus
8、）。同时，由于丝状真菌中的构巢曲霉标基因的表达，操作简单易行，是构建许多真菌收稿日期：2012-12-21作者简介：李彩红（1986-），女，硕士研究生，lch19860616@163.com；*通讯作者，zhuhq@cricaas.com.cn基金项目：国家支撑计划项目（2011BAD08A07）；中央级公益性科研院所基本科研业务专项2013年所长基金项目（SJB130
