PKD3上调HEK293中uPAR的表达及机制

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1、2100重庆医学2010年8月第39卷第16期·论著·PKD3上调HEK293中uPAR的表达及机制邹志鹏，冯丽，许万福，邓凡△(南方医科大学细胞生物学教研室，广州510515)摘要：目的研究蛋白激酶D3(PKD3)对人胚肾上皮细胞系HEK293细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)表达水平的影响及其机制，以阐明PKD3调控uPAR表达的重要作用。方法首先在HEK293细胞中过表达PKD3，并以佛波酯(PMA)刺激24h，而后采用实时定量PCR扩增PKD3、uPARcDNA，并使用2方法比较其相对表达量的变化。然后在HEK

2、293细胞中转染连环蛋白野生型质粒，并以PMA刺激1h，用免疫沉淀法检测PKD3与连环蛋白之间的相互作用。结果在转染的HEK293细胞中PKD3过表达，而且过表达PKD3可明显上调PMA诱导的uPARmRNA表达水平。同时在PMA刺激作用下，可明显增强HEK293细胞中PKD3与p一连环蛋白之间的相互作用。结论PKD3可能通过与p一连环蛋白的相互作用上调uPAR袁达。关键词：蛋白激酶D3；尿激酶型纤溶酶原激活物受体；B一连环蛋白doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2010．16．005中图分类号：R737．

3、25；R730．23文献标识码：A文章编号：167卜8348(2010)16—2100—03PKD3contributestoup-regulationofuPARexpressioninHEK293cellsZoUi—peng，FENGLi，XUWanfu，eta1．(DepartmentofCellBiology，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，C^ina)Abstract：ObjectiveToexplorethefunctionalroleandmechanismofP

4、KD3onuPARexpressioninhumanembryonickidney293cells．MethodsHEK293cellsweretransfectedwithpEGFP—C2orpEGFP—PKD3plasmidfollowedbyPMAtreatmentfor24h。mRNAlevelsofPKD3anduPARwerethenanalyzedbyRT—QPCRusing2△。method．Furthermore，HEK293cellsweretrans—feetedwithpEGFP—C2orpEGFP—Be

5、ta—CateninandthentreatedwithPMAfor1h，cellswereharvestedandpossibleinteractionofPKD3withBeta-CateninwasmeasuredbyImmunoprecipitationassay．ResultsuPARmRNAleveltriggeredbyPMAwasdramat—icallyincreasedinHEK293cellstransfectedwithpEGFP—PKD3comparedwithcellstransfectedwithp

6、EGFFLC2．Meanwhile，inter—actionofBeta—CateninwithPKD3wasenhancedinresponsetoPMAstimulationmanifestedbyImmunoprecipitation．ConclusionPKD3mayup-regulateuPARexpressionthroughBeta—catenininHEK293cells．Keywords：proteinkinaseD3；uPAR；Beta—catenin蛋白激酶D(proteinkinaseD，PKD)属于一类

7、新的结合二袭和转移中起重要作用_5_6_。uPAR的表达受多种转录因子如酰基甘油(DAG)和佛波脂(PMA)的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶AP1、HIF1一alpha及SP1调控，同时有研究表明，B-连环蛋白一家族，目前已鉴定出3种PKD亚型(PKD1、2、3)，分别参与细TCF4信号通路可通过AP1间接上调结肠癌细胞中uPAR的胞高尔基体反面膜转运、细胞存活、迁移、细胞分化、细胞增殖表达。和凋亡等多种细胞功能的调节_1]。PKD1在低侵袭型前列腺尽管PKD3与uPAR均可促进肿瘤的迁移，但肿瘤迁移和癌细胞LNCaP中表达水平较高，不

8、仅如此PKD1可磷酸化E一侵袭中PKD3及uPAR的相互调控关系尚未阐明。本研究拟钙粘素(E—Cadherin)，从而增强LNCaP的聚集，减弱其迁移能以人胚肾上皮细胞系HEK293为研究模型，探求PKD3对于力L3]。作者最近的研究显示，在高侵袭型前列腺癌细胞