血栓与止血检验的基本方法

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1、血栓与止血检验基本方法P367血管壁的正常结构包括三层：内层、中层和外层内层：内皮细胞+基底膜内皮细胞管壁有肝素类物质内皮细胞内含细胞器（棒状小体vWF和t-PA，TM，AT-Ⅲ,PAI-1等）中层：平滑肌细胞（脉细血管无此层）外层：结缔组织基本理论第一节、血管壁（内皮）检验血管内皮细胞检验血浆血管性血友病因子抗原vWF:Ag，LPEITA法原理：在待测血浆中加入包被有抗vWF:Ag单克隆抗体的胶乳颗粒，血浆中vWF:Ag与胶乳颗粒结合，使相邻的胶乳颗粒彼此相连，发生凝集反应，其凝集强度直接与血浆中的vWF:Ag含量成比例关系，通过血凝分析仪可快速测得。参考

2、值41.1%～125.9%（O型）；61.3%～157.8%（A+B+AB型）O型人群明显低于A+B+AB型人群vWF:Ag参考区间血管性血友病因子抗原测定主要用于血管性血友病的诊断和鉴别诊断1.减低见于血管性血友病（vWD），是诊断vWD及其分型的重要依据2.升高见于血栓性疾病，如急性冠脉综合征（ASC）、心肌梗死、脑血管病变、妊娠高血压综合征、肾小球疾病等，同时也见于剧烈运动后，肾上腺素受体被兴奋等。应用评价以前vWF：Ag定量常采用免疫火箭电泳，由于操作较为复杂，现在少用。ELISA常用于定量检测vWF：Ag，但是胶乳增强的免疫比浊法更为简便快速，而且

3、可以在全自动血凝仪上进行测定。vWF:Ag应用评价原理将抗人凝血酶调节蛋白（Thrombomdulin,TM）单克隆抗体包被于聚苯乙烯放免小杯中，样本中的TM结合于包被的放免小杯上，加入125I-抗人TM单抗，根据结合的125I放射性强度计算出样品中TM的含量。血浆血栓调节蛋白，TM放射免疫法TM:Ag的水平升高见于血栓性疾病，如糖尿病、心肌梗死、脑血栓、深静脉血栓形成（DVT）、DIC等。降低见于TM缺乏。TM：Ag参考区间20～35ng/mL第二节血小板止血作用及检验血小板（bloodplatelet）由骨髓中成熟巨核细胞的胞质分割生成，是哺乳动物血液中

4、体积最小的血细胞。血小板数量：(100～300)x109个/L（成年人）。血小板寿命：7～10天。主要功能：促进止血和加速凝血，在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中起重要作用。ADP血小板进一步激活、释放血块收缩内皮损伤（内皮下组织暴露）血小板粘附血小板初期释放ADP等血小板聚集纤维蛋白形成坚固的凝血块血小板促凝作用5-HT类别成分活性胺5-HT，组胺，肾上腺素，去甲肾上腺素腺嘌呤核苷酸ADP,ATP,cAMP阳离子Ca2+,K+血小板因子PF3,PF4等凝血因子凝血因子I，V，VIII，XIII血小板蛋白β-TG，血小板糖蛋

5、白等血栓烷TXA2血小板的主要释放产物血小板功能的实验室检查应用评价本试验是检测血小板功能的基本试验之一，试验简便、快速，成本低廉，在临床上开展比较广泛。血小板聚集率减低：见于血小板无力症、血小板贮存池病、血管性血友病、巨大血小板综合征、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、尿毒症、维生素B12缺乏症、细菌性心内膜炎、急性白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病、特发性血小板减少性紫癜、服用抗血小板药物等。血小板聚集率增高血液高凝状态和（或）血栓形成性疾病，如动脉粥样硬化性心脏病、糖尿病、肾小球肾炎、肾病综合征、心脏瓣膜置换术后、深静脉血栓形成、高脂饮食、口服避

6、孕药和吸烟等。血小板聚集实验PAgT光学比浊法和全血电阻抗法血小板膜糖蛋白（Glucoprotein，GP）是血小板功能和血小板与其他活性物质作用的基础，一些糖蛋白如GPIa、GPIb、GPIIb、GPIIIa等已被确定为血小板特异抗原。GP分子数量或结构异常均可导致出血或血栓形成。活化血小板与静止血小板相比，GP的种类、结构、含量等亦呈现显著变化。多采用流式细胞术（FCM）分析血小板膜糖蛋白的表达。血小板膜糖蛋白测定血小板自身抗体包括：血小板相关免疫球蛋白（plateletassociatedimmunoglobulin，PAIg）（包括PAIgG、PAI

7、gA、PAIgM）特异性膜糖蛋白自身抗体药物相关自身抗体抗同种血小板抗体血小板自身抗体测定表达有助于判断血小板减少的原因。检测血小板免疫相关球蛋白的常用方法为ELISA及流式细胞术。血小板自身抗体测定特发性血小板减少性紫癜（ITP）：90%以上的病人PAIgG增加，同时测定PAIgA、PAIgM及PAC3阳性率达100%。ITP病人在皮质激素治疗后，PAIgG不下降可作为切脾的指征。ITP疗效监测指标，治疗有效上述指标下降，复发则增加。血小板相关抗体测定的应用评价第三节血液凝固及检验14个：12个经典凝血因子激肽释放酶原+高分子量激肽原特征：因子Ⅳ为钙离子（

8、Ca2+）,其余均为蛋白质除因子Ⅲ即组织因子外，其余