《付瑞玲毕业答辩》PPT课件

《《付瑞玲毕业答辩》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、硕士研究生：付瑞玲导师：范雄林副教授华中科技大学同济医学院病原微生物学系结核杆菌特异抗原CFP21和MPT64融合蛋白的重组表达、纯化及其免疫原性研究背景EstimatedTBincidencerates,WHO20040-2425-4950-99100-299Noestimate300ormoreEstimatednewTBcases(allforms)per100000population结核病(TB)是经呼吸道传播的、严重危害全球人类健康的重大公共卫生问题全球感染者占总人口的1/3；我国感染人数5.5亿；感染者发展为结核病的可能性为5-10

2、%；缺乏特异的诊断方法；缺乏有效的疫苗我国和全球结核杆菌感染者3.值潜伏感染者的筛检和预防措施筛检方法：非特异性——TST的活性成份是纯蛋白衍生物(PPD)，一种结核分枝杆菌非特异的混合物,其检测结果可被目前临床上广泛使用的疫苗——卡介苗免疫所干扰。较特异性——更特异性——无预防疫苗：无研究目的1建立更加特异2寻找发展感染清除疫苗的适宜靶抗原3.值结核杆菌特异抗原的选择RD1区RD2区M.bovisM.tuberculosisM.KansasiiM.marinumM.lepraeM.szulgaiM.bovisM.tuberculosisBCGsu

3、bstrains（1921-1931）保护性抗原如CFP21、MPT64，分别能够刺激强的迟发型变态反应和诱导结核病人和他们的接触者的外周血产生高水平的干扰素重组表达CFP21和MPT64的融合蛋白，建立了全血IFN-γ水平分析技术(rCM-WBIA)，检测LTBI的以及评估该蛋白作为感染清除疫苗靶抗原的可能性CFP21和MPT64蛋白研究人群年龄范围（岁）受试者（人）男女比例结核病患者38±10104：6密切接触者35±183616：20TST-对照20±34022﹕18注:所有参与者均为自愿。实验流程IPTG诱导受试者TST-TST＋rCM-T

4、ST-rCM-TST+rCM+TST-rCM+TST+rCM+TST++2.SDS-PAGEWesternblot1.构建原核表达质粒3.纯化rCM4.建立rCM-WBIATST健康者密切接触者研究结果Table1PrimerlistandthermalcycleparametersforcloningofM.tuberculosisrecombinantantigensAntigenPrimerorientationandsequence（5‘-3’）PCRparametersAmpliconsizeCFP21FAAGGATCCGATCCGTG

5、TTCGGACATCGCGGTCGR:GCTGCCGCCACCGCCGCTTCCGCCACCGCCGCTTCCACCGCCACCTCCGGCGTGATCGAGCCTGTTCGCC94℃for5minThen30cycles94℃for1min60℃for1min72℃for45sThen72℃for5min608bpMpt64F:GGTGGCGGTGGAAGCGGCGGTGGCGGAAGCGGCGGTGGCGGCAGCGCGCCCAAGACCTACTGCGAGGAGR:GAAAGCTTCTAGGCCAGCATCGAGTCGATCGC94℃for5m

6、inThen30cycles94℃for1min60℃for1min72℃for45sThen72℃for5min671bprCMFCFP21FrCMRMPT64R94℃for5minThen30cycles94℃for1min60℃for1min72℃for90sThen72℃for10min1234bp2.SDS-PAGEWesternblot1.构建原核表达质粒3.纯化rCM4.建立rCM-WBIAFig.1PCRresultsandtheidentificationoftherecombinantplasmidpPro2164.Lane1,

7、therecombinantplasmidpPro2164digestionwithBamHIandHindIII;Lane2,PCRresultofthefusiongenefragmentencodingCFP21andMPT64witha45bplinker;Lane3,PCRresultofthegeneencodingmatureMPT64;Lane4,PCRresultofthegeneencodingmatureCFP21;MrepresentsDNAmolecularmarker.1.克隆原核表质粒Fig.4.IPTGinducti

8、onofrCMinrecombinantE.coliBL21(DE3).Lane1,proteinweightmarker