低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)

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1、五．低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中低聚木糖的含量的测定本方法检测限：食品中低聚木糖为0.10%。（一）方法提要试样中的低聚木糖经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定低聚木糖的含量。（二）仪器1.高效液相色谱仪带SEDEX75蒸发光散射检测器。2.超声清洗仪。3.天平（精确到0.001g和0.0001g）。4.微孔滤膜（PVDF0.45μm）。（三）试剂1.色谱用水（Millipore纯水器制备）。2.乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸,

2、加水溶解至100mL。3.亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。4.木二糖对照品，Wako公司(纯度≥90%)。5.木二糖标准溶液（10.0mg/mL）：精确称取50mg木二糖用蒸馏水定容至5mL容量瓶中，即得木二糖标准溶液。（四）测定步骤1.样品处理：①固体样品：取均匀样品1.0g(精确到0.1mg)于150ml锥形瓶中，加水30ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤

3、液待用。②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1mL)置于150ml锥形瓶中，加水20ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。2.标准工作曲线制作。精密吸取木二糖标准溶液1.0ml，5.0ml，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，摇匀。分别取10μL标准工作系列溶液进样分析，以测得的木二糖的峰面积，分别对木二糖的浓度绘制标准曲线。3．色谱条件2①色谱柱：

4、CosmosilSugarD氨基液相色谱柱250mmi.d.×4.60mm,5µm；②流动相：色谱用水＋乙腈=22+78(V+V)；③流速：1.0mL/min；④柱温：35℃；⑤蒸发光散射检测器：蒸发温度35℃，压力3.5Bar；4.样品测定。取样品滤液10μL进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量。（五）结果计算根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中山梨醇含量，计算出样品中的含量。试样中木二糖含量按下式进行计算。X=式中：X——试样中低聚木糖（以木二糖计）含量，

5、单位为克每一百克（毫升）（g/100g或g/100mL）；c——样液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V——样品的定容体积，单位为毫升（mL）；m——样品的取样量，单位为克（g）；计算结果保留三位有效数字。（六）注释1.低聚木糖是由2-7个木糖分子以β-1,4糖苷键结合而成的功能性聚合糖。与通常人们所用的大豆低聚糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖等相比具有独特的优势，它可以选择性地促进肠道双歧杆菌的增殖活性，其双歧因子功能是其它聚合糖类的10-20倍。木二糖是低聚木糖的主要组分之一，分子式为C10H18

6、O9。它为白色粉末，常温下易溶于水。2.也可用Waters公司2410示差检测器，检测池温度35℃，但检测灵敏度低于蒸发光散射检测器。3.文中试剂如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。参考文献[1]中华人民共和国卫生部主编，保健食品检验与评价技术规范:2003年版[M].北京：中华人民共和国卫生部，2003．291-293.2