rnai用于基因功能的鉴定和确证

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1、RNAi(shRNA/miRNA)用于基因功能的鉴定和确证广州复能基因有限公司李华平博士研发部主任FulenGenGainoffunctionORFexpressionclonesTansfection/TransductionLossoffunctionshRNA/miRNAChemicalgeneticsInhibitorsandactivatorsofbiologicalprocessAutomatedread-outmechanismTherapeuticstrategycellFulenGenGeneFunctionScreeningMechanis

2、mofRNAi(shRNA/miRNA)ComparisonofshRNAandmiRNApropertiesArchitectureshorthairpinSingle-strandOriginalExogenousEndogenousNo.ofintendedtarget1ManyDegreeofgenesilenceHighLowComplementarytomRNAtargetPerfectImperfectEffectonmRNAEndonucleolyticcleavageRepressedtranslationshRNAmiRNAFulenGen

3、FulenGenshRNA的设计与构建shRNA的验证miRNA的克隆与检测miRNA靶标的确证基因沉默后的功能拯救FulenGenFulenGenshRNA表达克隆的构建载体选择筛选标记和报告基因目的细胞shRNA序列设计高准确性的预测方法茎和环序列有效性检测3-5个shRNA/基因目的基因是否表达克隆和测序合成引物的长度茎环结构难以有效测序27mershRNAOligoDesign5’GATCGAGAGTGGAGGACGCTTTGCCTCCAAGCTCAAGAGGCTTGGAGGCAAAGCGTCCTCCACTCTTTTTTTGG3’3’CTCTCACCT

4、CCTGCGAAACGGAGGTTCGAGTTCTCCGAACCTCCGTTTCGCAGGAGGTGAGAAAAAAACCTTAA5’A(30)B(44)D(42)C(32)N1N27N27ASN1ASN1N27N27ASN1AS保证高表达抑制效率和最低的脱靶效应；慢病毒载体和以哺乳动物细胞表达载体；序列已经过测序；每个基因提供4个克隆，至少有1抑制水平达到70%以上提供包含不规则序列的阴性对照克隆来比较研究。OmicsLink™shRNA表达克隆FulenGen经过验证的人类激酶组shRNA表达克隆350个人类激酶基因的确证shRNA表达克隆表达抑制效应都经

5、过验证，达70％以上低的脱靶效应。FulenGenshRNA克隆用于信号通路研究qPCRPrimerarray即将上市采用先进的算法，精心设计的qPCR引物扩展长度100－250bp；PCR扩展效率>90%；每对引物的都经过扩展曲线、溶解曲线和电泳检测，包括扩展的特异性ExonicNon-codingMicroRNAs由RNAPolymeraseII转录IntronicNon-codingandcodingLee,etal.,EMBOJ.23:4051-602004/~-OHmatureandprimarymicroRNA的结构Pri-miRNADroshaC

6、leavagesiteMatureVector-BasedmicroRNAExpressionClonesPromoter5’miRflank3’miRflankPre-miRTerFulenGenIII型启动子II型启动子CMVeGFPPriMiRNAIRESPuromycinpolyAH1/U6eGFPPriMiRNAIRESPuromycinTTTTTTCMVVector-BasedmicroRNAExpressionClonesII型启动子III型启动子转录序列PriPri/Pre转录终止位置不确定确定转录产物不确定确定FulenGenOmicsLin

7、k™HumanPrecursormiRNAExpressionClonespEZ-MR02650种前体miRNA表达克隆涵盖了miRBase（11.0版本）中已知的678种miRNA的95%miRNA表达框已完全测序确证基于慢病毒载体系统的表达克隆可转染未分化细胞和难转化的细胞，获得与普通分化细胞类似的转染效率提供被转染细胞的存活性的筛选基因，可用于稳定或瞬时表达调控通过应用eGFP可以监测病毒和质粒载体的转染效率FulenGenmicroRNA肿瘤发生miR-9神经母细胞瘤miR-10b乳腺癌miR-15、miR-15a白血病、垂体腺瘤miR-16、miR-

8、16-1白血病、垂体腺瘤miR-17-