监测水体是否受粪便污染

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1、生物监测利用粪大肠菌群监测水域受粪便污染等级环境中的肠道病原菌主要来自人畜粪便。他们首先被排到水体或土壤，然后传播至其他环境导致人类感染得病。由于粪大肠菌群与粪便中大肠杆菌数直接相关，在人粪中粪大肠杆菌群占总大肠菌群的96.4%。因此要用粪大肠菌群为代表间接指示肠道病原菌存在的可能性。它也叫耐热性大肠菌群。一、采取水样在选取的水域中用事先准备好的容器盛取该水域的水体，保存好拿回实验室。并及时进行试验。（适用于饮用水、湖泊、水库、河川、溪流、井水、泉水、地下水、娱乐用水、海水及放流水等水样之粪便性大肠杆菌群细菌之检验，但不适用于高浊度及含有干扰物质之水样

2、之检验。）二、材料准备量筒：一般使用100、500及1000ml的量筒，培养皿MFC培养基滤膜恒温培养箱乳糖蛋白胨培养基二、测定步骤原理：滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45μm）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M−FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数1、MFC培养基的制备胰胨、多胨和酵母膏提供碳源、维生素和生长因子；氯化钠维持均匀的渗透压；乳糖为可发酵糖类；3号胆盐抑制革兰氏阳性菌；琼脂是培养基的凝固剂；玫红酸和苯胺蓝PH指示剂。配方

3、胰胨10g多胨5g酵母膏粉3g氯化钠5g乳糖12.5g3号胆盐1.5g琼脂15g玫红酸0.1g苯胺蓝0.1g最终PH7.4±0.2制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节pH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100mL，于115℃灭菌20min。贮于冰箱中备用。临用前，按上述配方比例，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1mL及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）1mL，混合均匀。加热溶解前，加入1.2%～1.5%琼脂可制成固体培养基。如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。2、

4、培养基的存放在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。1、滤膜及滤器的灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。也可用121℃灭菌10min，10min一到，迅速将蒸汽放出，这样可以尽量减少滤膜上凝集的水分。滤器、接液瓶和垫圈分别用纸包好，在使用前先经121℃高压蒸汽灭菌30min。滤器灭菌也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。4、水样过滤。选用孔径为

5、0.45微米的滤膜过滤检样，细菌被截留在滤膜上。5、培养。：使用M−FC培养基。培养基含或不含琼脂，不含琼脂的培养基使用已用M-FC培养基饱和的无菌吸收垫。将滤过水样的滤膜置于琼脂或吸收垫表面。将培养皿紧密盖好后，置于能准确恒温于44.5℃±0.5℃的恒温培养箱或恒温水浴中，经24h±2h培养。若用恒温水浴培养，则需用防水胶带贴封每个平皿，将培养皿成叠封入防水塑料袋或容器内，浸没在44.5℃±0.5℃恒温水浴中。在培养时间内，装培养皿的塑料袋必须用重物坠于水面之下，以保持所需的严格温度。所有已制备的培养物都应在过滤后30min内浸入水浴内。6、观察结果

6、。粪大肠菌群菌落在MFC培养基上呈蓝色或蓝绿色，其他非粪大肠菌群菌落呈灰色、淡黄色或无色。正常情况下，由于温度和玫瑰酸盐试剂的选择性作用，在MFC培养基上很少见到非粪大肠菌菌落。7、检验注意事项(1)将接种好的样品放人恒温水浴箱或隔水式恒温培养箱时，箱内温度一定要求达到所要求的温度(44±1℃)时，方可放入。如用恒温水浴箱其水面要高于接种物面，放滤膜的培养皿要沉到水浴箱底部。（2）在滤膜上生长的菌落除挑取蓝色菌落外，浅蓝色菌落或浅蓝色中心较深的菌落也应挑取。(3)采样后水样的正确保存很重要，如保存不当可使检样中的大肠菌群细菌死亡或在一定条件下再生长，这

7、些都将影响检验结果的准确性。检验室接到水样后，应立即检验。如因故不能检验时，应立即置于冰箱内并于2小时内检验。计数呈蓝或蓝绿色的菌落，计算出每1L水样中的粪大肠菌群数。粪大肠菌群菌落数（个/L）=（滤膜上生长的粪大肠菌群落数*1000）/过滤水样量（ml）讨论在测定出的结果中会有些干扰比如（一）水样中含有抑制或促进粪便性大肠杆菌群生长之物质。（二）检验使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进粪便性大肠杆菌群生长之物质。（三）浊度过高的水样易造成滤膜孔隙阻塞，影响水样检验结果之判读。这些干扰都会影响测定的数值，同时也导致对水体评级产生不同的结果四、结果评定在地

8、表水中Ⅰ级≤200个/LⅡ级≤2000个/LⅢ级≤10000个/LⅣ级≤20000个/LⅤ级≤