微生物的生长及其控制放映

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1、第六章微生物的生长及其控制群体的生长可用其重量、体积、个体浓度或密度等作指标来测定。所以个体和群体间有以下关系：个体生长个体繁殖群体生长群体生长=个体生长＋个体繁殖第一节测定生长繁殖的方法一测生长量适用于一切微生物（一）直接法有粗放的测体积法（在刻度离心管中测沉降量）和精确的称干重法。微生物的干重一般为其湿重的10%～20%。（二）间接法1，比浊法分光光度法对无色的微生物悬浮液测定，波长450～650nm波段。若要连续跟踪某一培养物的生长动态，可用带有侧臂的三角烧瓶作原位测定。2．生理指标法与微生物生长量相平行的生理指标，根据实验目的和

2、条件适当选用。最重要的如测含量氮法二、计繁殖数测定繁殖一定要一一计算各个体的数目。计繁殖数只适宜于测定处于单细胞状态的细菌和酵母菌，而对放线菌和霉菌等丝状生长的微生物而言，则只能计算其孢子数。（一）直接法指用计数板在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。此法得到的数目是包括死细胞在内的总菌数。解决方法，已有用特殊染料作活菌染色后再用光学显微镜计数的方法，(酵母菌美蓝液染色、细菌丫啶橙染色）。血球计数板在光学显微镜下直接进行计数的方法。（二）间接法是一种活菌计数法。这是一种依据活菌在液体培养基中会使其变混或在固体培养基上（内）形成菌落

3、的原理而设计的。最常用的方法是利用固体培养基上（内）形成菌落的菌落计数法。1．平板菌落计数法可用浇注平板或涂布平板等方法进行。此法适用于各种好氧菌或厌氧菌。操作：把稀释后的菌样分散在琼脂平板上（内），培养后，形成一个个单菌落，此即“菌落形成单位”（cfu），根据每皿上形成的cfu数乘上稀释度就可推算出菌样的含菌数。2.厌氧菌的菌落计数法采用亨盖特滚管培养法进行。第二节微生物的生长规律一、微生物的个体生长和同步生长1、用电子显微镜观察细胞的超薄切片2、使用同步培养技术同步培养技术:即设法使某一群体中的所有个体细胞尽可能都处于同样细胞生长和

4、分裂周期中，然后通过分析此群体在各阶段的生物化学特性变化，来间接了解单个细胞的相应变化规律。同步生长:这种通过同步培养的手段而使细胞群体中各个体处于分裂步调一致的生长状态.获得微生物同步生长的方法主要有两类获得微生物同步生长的方法主要有两类：①环境条件诱导法用氯霉素抑制细菌蛋白质合成；细菌芽孢诱导发芽；藻类细胞的光照、黑暗控制用EDTA或离子载体处理酵母菌；以及短期热休克（40T）法「用于原生动物（梨形四膜虫）〕等。②机械筛选法利用处于同一生长阶段细胞的体积、大小的相同性，用过滤法、密度梯度梯度离心法或膜洗脱法收集同步生长的细胞。其中以

5、的膜洗脱法较有效和常用二、单细胞微生物的典型生长曲线定量描述液体培养基中微生物群体生长规律的实验曲线，称为生长曲线。以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标，就可画出一条由延滞期、指数期、稳定期和衰亡期4个阶段组成的曲线，延滞期的特点为：①生长速率常数为零；②细胞形态变大或增长，许多杆菌可长成丝状.；③细胞内的RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈嗜碱性；④合成代谢十分活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加速，易产生各种诱导酶；⑤对外界不良条件如NaCl溶液浓度、温度和抗生素等理、化因素反应敏感。影响延滞期长短的因素很多除菌种外，主要

6、有3种：(1)接种龄指接种物或种子的生长年龄(2）接种．接种量的大小明显影响延滞期的长短。(3）培养基成分（二）指数期指数期：又称对数期，指在生长曲线中，紧接着延滞期的一段细胞数以几何级数增长的时期。指数期的特点是：①生长速率常数R最大，因而细胞每分裂一次所需的时间—代时②细胞进行平衡生长，③酶系活跃，代谢旺盛。影响指数期微生物代时长短的因素①菌种②营养成分③营养物浓度④培养温度（三）稳定期稳定期又称恒定期或最高生长期。特点:生长速率常数R等于零，即处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，或正生长与负生长相等的动态平衡之中。（四）衰亡期在

7、衰亡期中，微生物的个体死亡速度超过新生速度，整个群体呈现负生长状态（R为负值）。特点:细胞形态发生多形化，例如会发生退化形态；发生自溶合成或释放次生代谢物；芽孢杆菌中释放芽孢.三、微生物的连续培养连续培养的实现:当微生物以单批培养的方式培养到指数期的后期时，一方面以一定速度连续流入新鲜培养基和通人无菌空气，并立即搅拌均匀；另一方面，利用溢流的方式，以同样的流速不断流出培养物。容器内的培养物达到动态平衡，其中的微生物可长期保持在指数期的平衡生长状态和衡定的生长速率上，形成了连续生长。两种连续培养器①恒浊器：根据培养器内微生物的生长密度，并

8、借光电控制系统来控制培养液流速，以取得菌体密度高、生长速度恒定的微生物细胞的连续培养器。(1）按控制方式分②恒化器：与恒浊器相反，恒化器是一种设法使培养液的流速保持不变，并使微生物始终在低于其最高生长速率的