阎-实验六-生理生化

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1、（一）化学因素对微生物生长的影响（二）细菌的生理生化反应实验六实验目的：了解常用化学消毒剂对微生物的作用实验一化学因素对微生物生长的影响常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类、有机溶剂（酚、醇、醛等）、卤族元素及其化合物、染色剂和表面活性剂等。实验原理：1氧化剂：通过强烈的氧化作用杀死微生物。碘的杀菌力强，3－7％碘溶于70－83％的乙醇中成碘酒。2重金属盐类：使蛋白质变性、沉淀，使酶失活。0·02－0·2％HgCl2（升汞）溶液对大多数细菌有致死作用。3有机溶剂：使蛋白质及核酸变性、破坏细胞膜透性，抑制脱氢酶，氧化酶活性。乙醇（70%）4表面活性剂：具有降低表面张力效应的

2、物质，可抑菌或杀菌。甲酚杀菌力最强煤酚皂液（来苏尔）为甲酚和肥皂的混合液。新洁尔灭：破坏细胞的渗透性实验材料1菌种：大肠杆菌2培养基：牛肉膏蛋白胨培养基3消毒剂：2.5%碘酒，0.5%石碳酸，75%乙醇，100%乙醇，1%来苏尔，0.25%新洁尔灭，无菌生理盐水实验步骤1倒牛肉膏蛋白胨平板2取0.2ml大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。3将平板(皿底）划分为6等份，分别将浸有各种消毒剂的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。4将贴好滤纸片的含菌平板，置37℃倒置培养24-48h。5测量并记录抑菌圈的直径，根据其直径的大小，可初步确定测试药品的抑菌效能。（自带尺子）实验结果思考题

3、书p97思考题第11题消毒剂抑（杀）菌圈直径/mm消毒剂抑（杀）菌圈直径/mm2.5%碘酒5%石炭酸（苯酚)100％乙醇1%来苏尔75%乙醇0.25%新洁尔灭实验二：细菌的生理生化反应（IMViC与硫化氢试验）吲哚（I）、甲基红（M）、V.P.试验（Vi）、柠檬酸盐利用（C）试验。用以将大肠杆菌与其形状十分相近的肠杆菌属的细菌鉴别开来。实验目的：1学习几种主要微生物的生理代谢试验及检验方法认识微生物代谢类型的多样性。2了解IMViC反应在肠道菌鉴定中的意义和方法实验原理：1吲哚试验：用来检测吲哚的产生，有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙氨酸。吲哚+对

4、二甲基氨基苯甲醛红色的玫瑰吲哚色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚吲哚试剂2甲基红试验（M.R）：大肠杆菌与产气肠杆菌在利用葡萄糖进行发酵时，前者可产生大量的混合酸，使pH﹤4.5；后者则产生大量的中性化合物丁二醇，pH﹥4.5，因此在发酵液中加入甲基红试剂时，前者呈红色，后者呈黄色。葡萄糖乳酸丙酮酸乙醛乙酰CoA甲酸乙醇乙酰乳酸二乙酰3-羟基丁酮2,3-丁二醇CO2H2-乙酰乳酸合成酶-乙酰乳酸脱羧酶2,3-丁二醇脱氢酶一些细菌具有-乙酰乳酸合成酶系而进行丁二醇发酵。EMP产气杆菌大肠杆菌大肠杆菌3V.P.试验碱性条件氧红色化合物（与培养基中精氨酸的胍基结合）发酵途径：葡萄糖

5、→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙酰→红色化合物+胍基化合物葡萄糖→丙酮酸大肠杆菌－产气杆菌＋4柠檬酸盐利用试验：有些细菌如产气肠杆菌能利用柠檬酸盐作为碳源，产生碱性化合物，使培养基的pH升高，当加入溴麝香草酚蓝指示剂时，培养基会由绿色变为深蓝色。IMViC试验VPtestCitrateutilizationtestIndoltestMethyltestIMViC大肠杆菌++——产气肠杆菌——++常用于肠道杆菌的鉴定5硫化氢试验：有些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，当其遇到培养基中的铅或铁盐时，形成黑色的沉淀物。实验材料菌种：大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌培养基：蛋白胨水培养

6、基（吲哚试验）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和伏－普试验）柠檬酸盐斜面培养基、醋酸铅培养基（硫化氢试验）实验步骤一接种与培养1用接种针将大肠杆菌、变形杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基2将大肠杆菌、产气杆菌分别接种于2支蛋白胨水培养基（吲哚试验）、4支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和V.P.试验）中，置37℃培养24-48h。3柠檬酸盐斜面培养基4对照（所有同学共用）二结果观察(时间)2、学生按实验书所介绍的操作方法进行生化反应试验，将实验结果填入下表中（六人一组结果共享）菌种吲哚试验甲基红试验V.P.试验H2S试验柠檬酸盐大肠杆菌产气杆菌变形杆菌）3思考题：见书p12

7、0思考题第1题▲硫化氢试验培养24h后观察黑色硫化铁的产生。▲吲哚试验　在培养24h后的蛋白胨水培养基中加入3--4滴乙醚，摇动数次，静置1--3min，待乙醚上升后，沿试管徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。▲甲基红试验　在培养24h后的葡萄糖蛋白胨水培养基内加入甲基红试剂2滴，培养基变红者为阳性，变黄者为阴性。（注意：甲基红试剂加得过多，可出现假阳性现象。）▲伏－普试验在培养24h后的葡萄糖蛋白胨水培养基内加入5－10滴40％KOH，然后加入等量的5％α-萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中