三种壁虎染色体核仁组织者的银染色观察与蹼壁虎的核型 Observation on the Ag-NORs in 3 Species

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1、途些HEREDITAS(Beijing)17(1):16-181995三种壁虎染色体核仁组织者的银染色观察与无蹼壁虎的核型郭超文李洁莉①（安徽师范大学生物系，芜湖241000)摘要本文以骨髓细胞为材料，采用常规制片法和一步银染色技术，首次报道了无蹼壁虎、铅山壁虎和多疵壁虎的NORs，并用“一疏基乙醇短期培养无蹼壁虎的骨髓细胞，分析其核型．结果表明，3种壁虎都仅显示一对NORs，也未见有融合现象．其中无蹼壁虎的NORs位于第18对染色体的次缀痕区，而铅山壁虎和多疵壁虎分别位于第19对和第14对上．另外，我们从C带分析中发现，铅山壁虎和多庆壁虎的NORs位点均

2、为结构异染色质区．经a-琉基乙醇培养的无蹼壁虎的染色体明显“拉长，．具次隘痕的染色体可从以往报道的第19对调整为第18对，其次组痕区也比直接制作的标本大而清晰．关键词无蹼壁虎，铅山壁虎，多庆壁虎，核仁组织者，核型ObservationontheAg-NORsin3SpeciesofGekkoandtheKaryotypeofG.swinhonisGuoChaowenLiJieli(DepartmentofBiology,AnhuiNormalUniversity,Wuhu241000自从银染色（Ag-AS)技术被用于染色体核仁组织者（NORs)的染色研究以

3、来，已证明核仁组织者区域也就是18s+28s核糖体基因（rDNA）的分布区（(4.5)。我国壁虎属(Gekko)中的不少种核型已经报道过〔’，’）．但中期染色体NORs的分布及其活性尚未见报道。本文研究了采自安徽的无蹼壁虎（G.swinhonis)，铅山壁虎（G.hokonensis)和多疵壁虎（G.japonicus)的NORs，并用：一琉基乙醇短期培养无蹼壁虎的骨髓细胞，以增大染色体长度，提高核型分析的准确性。1材料与方法1.1实验动物无蹼壁虎47只（28早，19古），铅I力壁虎20只（7早，13古）和多疵壁虎20只（6罕，14古），分别采自安徽省宿县

4、、郎溪和芜湖安徽师大校园。①现工作单位：安徽淮北煤炭师范学院，235000】期郭超文等：三种壁虎染色体核仁组织者的银染色观察与无蹼壁虎的核型171.2方法每只实验动物按2-3微克／克体重腹腔注射秋水仙素溶液。3小时后取骨髓．(1)用0.4%KC]冲洗骨髓细胞，并直接滴于洗净的载玻片上．用蒸气固定法制作染色体标本（(2)，空气干燥后用一步银染色技术染色(6)。观察每种动物10个分裂相，确定其NORs的分布与活性。(2）取8只雌性和6只雄性无蹼壁虎，分别用0.75%NaCl冲出骨髓细胞，1000转／分离心5分钟，去上清液后再加少量新鲜075%NaCl收集细胞，

5、并转人小培养皿中，加8毫升培养液(RPMI-16406毫升，小牛血清1毫升，300微克／毫升：一琉基乙醇1毫升），在251C温箱中培养5小时．常规制片，空气干燥，Giemsa液（pII6.8)染色．参照Sumner法制备染色体C带标本〔B)2结果2.1NORs观察银染核型如图版I,1-3B。从图中可见，3种壁虎都仅显示一对NORs，其中无蹼壁虎的NORs位于第18对染色体的次绕痕区。铅山壁虎的NORs位于第19对。而多疵壁虎的NORs则位第14对的长臂末端区．这3个种的NORs均无融合现象，其面积以铅山壁虎最大，多疵壁虎次之，而无蹼壁虎最小．特别是铅山壁虎

6、的NORs面积大，而且位于最小的第19对染色体。因此，几乎无法判定其在染色体上的准确位置。图．多庆壁虎和铅山壁虎的银染（】元2A）和C带（IR,2田1s遗传HEREDITAS(Beijing)199517卷我们分析了多疵壁虎和铅山壁虎的C带核型（见图l)，并与银染色结果比较，发现两个物种的染色体均显示着丝点C带，除此以外，NORs区域也都显示出深的C带．C>t｝";`诗纹而积与NORs有对应关系，即多疵壁虎第14对染色体显示着丝点C带和长臂端粒C带，而铅山壁虎第19对染色体的着丝点C带与NORs区C带相融合，与大而积NORs现象相二致。2.2无蹼壁虎的核型

7、无蹼壁虎核型如图版I,lA。与已往报道的结果相比较，具次缀痕的染色体调整为第18对，这是分析：一琉基乙醇短期培养细胞的核型以后确定的．另外，经比较，短期培养细胞的染色体长度普遍比直接制备的长，次隘痕区也显得大而清晰．但培养后仍未发现有异型的性染色体。3讨论3.1已经知道核仁组织者区与某一染色体对特定位置有关，并且随物种的不同而不同，是研究生物种性差异与分类的重要特征之一。本文分析的3种壁虎中，均仅显示一对NORs，并无扩增现象，因此，就NORs的数目来说，可以判定它们是处于同一演化水平的．因为，据Schmid"）的观点，NORs数目多者玻特化，少者原始。但

8、是，这3个种的NOR：各自分布于不同的染色体对上，其显色的面积也有