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《多壁碳纳米管固定化生物酶修饰电极检测杂色曲霉素的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、20卷4期生物工程学报Vol.20No.42004年7月ChineseJournalofBiotechnologyJuly2004多壁碳纳米管固定化生物酶修饰电极检测杂色曲霉素的初步研究111*121姚冬生文圣梅刘大岭谢春芳白燕冉艳红(1暨南大学生命科学技术学院生物技术室,2暨南大学生命科学技术学院化学系分析化学教研室,广州510632)摘要杂色曲霉素(ST)是一种致癌致畸的真菌毒素,已报道的检测ST的技术有TLC、HPLC、ELISA以及毒素基因的PCR检测技术。初步探索了酶生物传感器三电极系统对ST的电化学分析。在实验中,应用多壁碳纳米管作为分子识别元
2、件ADTZ的固定化基质和传感器的电子传递体构建了Au工作电极,对ST进行CV和DPV分析,结果表-5-5明:ST在-600mV位置有一明显的特征还原峰电位,线性检测范围是83210~665610mgmL,检测下限为-583210mgmL,响应时间10s,为进一步的研究打下良好的基础。关键词杂色曲霉素,多壁碳纳米管,酶,传感器中图分类号Q503文献标识码A文章编号10003061(2004)04060106杂色曲霉素(Sterigmatocystin,ST)是日本学者初THERMO公司,USA),透射电镜(TECNAI10,Philips,田勇一等1
3、954年从杂色曲霉(Aspergillusversicolor)Heland),电化学分析仪(BAS100,BAS公司,USA),三[1]菌丝体中首先分离并命名的,是真菌中黄曲霉毒电极系统:参比电极为AgAgCl电极,对电极为Pt丝素合成途径的前体(sterigmatocystin(ST)O电极(BAS100配置);工作电极:Au电极(天津兰力[2]methylsterigmatocystin(OMST)AFB1),结构酷科技公司),pH计(METTLERTOLEDO320S,上海,似黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)。但杂色曲霉素由于中国),多壁碳纳米管(Multiw
4、allcarbonnanotube,污染含量高,危害性高于黄曲霉毒素,与地区性肝MWNT)购自深圳纳米港,超速冷冻离心机(Sorvall[3]癌、胃癌、食道癌的发生呈很大的正相关性。目前RC5B,Dupont,USA),杂色曲霉素(Stgerigmatocys已报道的检测杂色曲霉素的方法有:薄板层析tin,ST)购自Sigma公司,其它试剂均为国产分析纯(TLC),酶联免疫吸附测定(ELISA),高效液相色谱试剂,所有实验均在室温下进行。[4-12](HPLC),毒素基因的PCR检测等。电化学检测[15,16]12羧化多壁碳纳米管溶液的制备杂色曲霉素还尚未见报道。将MWNT用王
5、水(浓硝酸:浓硫酸=1!3)回流9本实验室在先前的研究证明黄曲霉毒素解毒酶~10h,10000g。15min离心,弃上清,用二次蒸馏水(Aflatoxindetoxinfizyme,ADTZ)对AFT有良好的解毒清洗沉淀,10000g,15min离心,重复此步骤2次。作用,并且发现ADTZ对ST也有相似的催化作[13,14]置于烘箱中烘干。然后称取上述1mg羧基化的用。本研究利用该酶作为杂色曲霉素的分子识MWNT溶于10mL的二甲基甲酰胺(DMF)中,超声波别元件,并且利用羧化多壁碳纳米管做酶固定化载搅拌均匀后,配成01mgmL的溶液。体及中间电子传递体构建金工作电极,探讨用三电1
6、3酶液的制备极系统电分析方法检测杂色曲霉素的可行性。[17]ADTZ的制备参照Liu等报道方法。酶液浓1材料和方法度0189gL,活力为300u(以ST在波长230nm处11仪器与试剂的紫外最大吸收值下降一个单位所需的酶量为酶的原子力显微镜(AUTOPROBECPRESEARCH,活力值)。收稿日期:20031212,修回日期:20040322。基金项目:国家自然科学基金(No.39970664)及广东省自然科学基金重点项目(No.010418)资助。*通讯作者。Tel:862085228422;Fax:862085226223;Email:tldl@
7、jnu.edu.cn602生物工程学报20卷[18,19]14MWNT修饰酶电极的制备将Au电极以牙膏、硅藻土在绒布上打磨至光亮,并依次在丙酮、05molL的NaOH溶液、1!1浓硝酸以及双蒸水中超声波清洗,每次3~5min,将10LMWNT溶液滴加在电极表面,置于60∀烘箱中烘干成膜后,将电极置于酶液中4∀冰箱中过夜,用之前用PBS缓冲液冲洗电极3次,洗去电极表面未固定上的酶。15MWNT修饰AD
