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1、第38卷第2期海洋与湖沼Vol.38,No.22007年3月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICAMar.,2007*紫菜(Porphyra)遗传差异的ISSR分析孙雪骆其君杨锐裴鲁青(宁波大学海洋生物工程重点实验室宁波315211)提要采用ISSR标记技术对来自不同产地的6个坛紫菜(Porphyrahaitanensis)无性系和两个条斑紫菜(P.yezoensis)无性系进行了遗传差异的分析。结果表明,7条ISSR引物在8个紫菜系中共扩增出59条片段,全部表现出多态性。根据Nei等的相似性系数得出8个紫菜系间的遗传距离在0.274—0.746之
2、间。用UPGMA方法作出的系统树中各紫菜基本上是按照产地进行聚类,从而推测紫菜的遗传差异可能与地域分布相关。本文结果也证明了ISSR与RAPD、AFLP等标记技术一样适用于紫菜的遗传多样性分析。关键词坛紫菜,条斑紫菜,ISSR,遗传距离中图分类号Q789紫菜(Porphyra)中含有丰富的蛋白质、维生好的稳定性和多态性(Fangetal,1997;李文红等,素和钙,是深受人们喜爱的海洋食品,也是海水2005)。目前ISSR(或与RAPD、SSR等技术一起)养殖中经济价值最大的海藻。同时,紫菜与虾、已经广泛用于高等植物的种质资源评价、进化和贝等海洋动物的混养实验表明,紫
3、菜养殖对于环系统发育关系分析、遗传多样性以及遗传作图与境的调节和改善也具有重要的生态意义。目前,基因定位等多个研究领域。但在低等植物——藻我国养殖紫菜主要有两种,一是以江苏为代表的类中ISSR应用的报道并不多,仅见于串珠藻条斑紫菜(P.yezoensis),另一种是浙闽两省为主(Batrachospermumboryanum)(Vis,1999)和江蓠的坛紫菜(P.haitanensis)。紫菜间的种系区分多依(Gracilaria)(孙雪等,2003)两类海藻中。据形态学和细胞学结果进行,但不同的生活环境1材料与方法等外界因素会使藻体发生某些形态上的改变。尤1.1实
4、验材料其是用做实验室保种和生产育苗的紫菜丝状体,本文中选用了6个坛紫菜无性系和两个条斑有时相互之间只能依据其发育成的叶状体来进行紫菜无性系作为实验材料,这些材料均由本实验分辨。为了检验不同紫菜丝状体的遗传多样性,室定名与保藏。6个坛紫菜系分别为Hza、Hzc、以便为今后的紫菜分子标记辅助育种提供基因水Hzf、Hpt、Hmy、Hzz,其中Hza、Hzc、Hzf为平的资料,作者对6个坛紫菜无性系和两个条斑福建平潭的养殖紫菜,而Hpt为来自浙江普陀山紫菜无性系进行了简单序列重复区间扩增多态性的野生紫菜,Hmy和Hzz为浙江养殖紫菜。Yn51(inter-simplesequ
5、encerepeat,ISSR)的标记分析。和Yn55是来自江苏南通的两个养殖条斑紫菜无性系。培养条件:MAV3号培养基,温度为13—ISSR是Zietkiewicz等(1994)在微卫星(SSR)15℃,光照周期为12h12h。基础上建立的一种分子标记技术。该技术以加有1.2试剂与引物锚定碱基的SSR序列作为引物,特异地扩增位于植物基因组DNA提取试剂盒购自北京鼎国,反向排列的SSR位点之间的DNA序列,根据其PCR试剂购自上海生工。所用ISSR引物(表1)由差异来分析材料的多样性。ISSR通常为显性标记上海生工合成。(Tsumuraetal,1996),呈孟德尔式
6、遗传,具有很*浙江省自然科学基金项目,M403015号、Y304094号。孙雪,博士,副研究员,E-mail：sunxue@nbu.edu.cn收稿日期:2005-11-22,收修改稿日期:2006-04-25142海洋与湖沼38卷1.3DNA的提取态性。称取约10mg吸干水分的紫菜丝状体,真空在引物P60、P02的扩增图谱中两个浙江养冷冻干燥后按植物基因组DNA提取试剂盒的操殖坛紫菜系(Hmy和Hzz)的扩增图谱相似,在引作说明进行紫菜基因组DNA的提取。DNA的浓物P16的扩增图谱中3个浙江坛紫菜(Hpt、Hmy、度确定使用Kodak软件(标准浓度DNA样品做参H
7、zz)的扩增结果类似,而在引物P47、P16的扩增照)。图谱中条斑紫菜Yn51和Yn55的带型基本相同。1.4PCR扩增与电泳检测因此,依据以上4条引物的电泳图谱可以很容易PCR反应在GeneAmpPCRsystem2400地将两个江苏条斑紫菜、3个浙江坛紫菜和两个(PerkinElmer)中进行。反应体系(总体积为20µl)浙江养殖坛紫菜与其他紫菜区分开。中包括15ng模板DNA、1.5mmol/LMgCl2、0.2mmol/LdNTP、0.2µmol/L引物和1单位的Taq酶。PCR扩增程序为94℃预变性5min,然后按照94℃变性50s,复性(
