注射用脑蛋白水解物质量标准

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1、附件4：注射用脑蛋白水解物ZhusheyongNaodanbaiShuijiewuCerebroproteinHydrolysateforInjection本品为猪脑蛋白水解物溶液（供注射用）与适宜的赋形剂制成的无菌冻干品。每瓶含总氮（N）应为标示量的90.0％～110.0％，含总氨基酸（以氮计）应为总氮的85％～100％，含肽（以氮计）应不低于总氮的20％。【性状】本品为白色至淡黄色疏松块状物或粉末。【鉴别】（1）取本品适量，加水溶解并制成每1ml中约含6mg的溶液，取2ml，加双缩脲试液（取硫酸铜0.75g和

2、酒石酸钾钠3.0g，加水250ml使溶解，在搅拌下加入10%氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml）4ml，应显紫红色。（2）在肽含量测定项下记录的游离氨基酸色谱图中，供试品溶液色谱图中各氨基酸峰的保留时间应与相应对照品峰的保留时间一致。（3）取本品，按标示量加水溶解并制成每1ml中约含6mg的溶液，作为供试品溶液。另精密称取脑蛋白水解物对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含总氮6mg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD）测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长25

3、0mm，内径4mm，粒径5μm）；以0.1%三氟醋酸溶液为流动相A；以0.085％三氟醋酸乙腈溶液－0.1%三氟醋酸溶液（80:20）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8ml；检测波长为276nm。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）01000405050450100530100551000651000精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品溶液的色谱图与对照品溶液色谱图的相似度（扣除色氨酸峰后）不得低于0.9。【检查

4、】酸碱度取本品，按标示量加水溶解并稀释制成每1ml中约含6mg的溶液，依法测定（中国药典2010年版二部附录VIH），pH值应为6.9～7.5。溶液的澄清度与颜色取本品5瓶，分别按标示量加水制成每1ml中含6mg的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录IXB和IXA第一法），溶液应澄清无色；如显色，与黄色6号标准比色液比较，均不得更深。蛋白质取本品，按标示量加水制成每1ml中含6mg的溶液，取5ml，加20%磺基水杨酸溶液2ml，混匀，溶液不得出现浑浊。高分子杂质照分子排阻色谱法（中国药典2010年版二部附

5、录VH）测定。色谱条件与系统适用性试验用亲水高效体积排阻硅胶为填充剂（如：TSKGEL2000SWxl，柱长300mm，内径7.8mm，粒径5μm；或性能相当的色谱柱）；以三氟乙酸-乙腈-水（0.05：40：60）为流动相，流速为每分钟0.7ml；检测波长为214nm。理论板数按核糖核酸酶A峰计算不得低于5000，各相邻峰之间的分离度按峰高与峰谷之比计算均不得小于3.0。标准曲线的制备取核糖核酸酶A(分子量13700)、胰岛素(分子量5808)、胸腺肽α1(分子量3108)、生长激素释放抑制因子(分子量1638)

6、各适量，分别用流动相溶解并定量制成每1ml中约含1mg的溶液作为分子量标准溶液。取上述标准溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样的保留时间相对偏差不得大于2.0%。以各峰的保留时间为横坐标，分子量对数为纵坐标进行线性回归，相关系数不得小于0.99。测定法取本品，按标示量加流动相稀释制成每1ml中含1mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以面积归一化法计算，供试品溶液色谱图中分子量大于5000道尔顿的高分子杂质不得过1.0%。水分取本品，照水分测定法（中国药典2010年版二部附录VII

7、IM第一法A）测定，含水分不得过3.0％。活力测定取本品1瓶，加10%小牛血清培养液制成每1ml中含氮量为60µg的溶液。照活力测定法（见附）测定，修复率不得低于100%。异常毒性取本品，按标示量加氯化钠注射液溶解并制成每1ml中含6.0mg的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录XIC），按静脉注射法给药，应符合规定。过敏反应取本品，按标示量加氯化钠注射液溶解并制成每1ml中含6.0mg的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录XIK），应符合规定。细菌内毒素取本品，依法检查（中国药典2010年版二部

8、附录XIE），每1mg总氮中含内毒素的量应小于0.20EU。降压物质取本品，依法检查（中国药典2010年版二部附录XIG），剂量按猫体重每1kg注射2.0mg（按总氮计），应符合规定。无菌取本品，用0.1%无菌蛋白胨溶液溶解后，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨溶液分次冲洗（每膜不少于100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（中国药典2010年版二部附录X