脑蛋白水解物注射液质量标准

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1、附件3：脑蛋白水解物注射液NaodanbaiShuijiewuZhusheyeCerebroproteinHydrolysateInjection本品为猪脑蛋白水解物溶液（供注射用）制成的灭菌水溶液，每1ml中含总氮（N）应为5.49～6.71mg，含总氨基酸（以氮计）应为总氮的85％～100％，含肽（以氮计）应不低于总氮的20％。【性状】本品为浅黄色澄明液体。【鉴别】（1）取本品2ml，加双缩脲试剂（取硫酸铜0.75g和酒石酸钾钠3.0g，加水250ml使溶解，在搅拌下加入10%氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml）4

2、ml，应显紫红色。（2）在肽含量测定项下记录的游离氨基酸色谱图中，供试品溶液各氨基酸峰的保留时间应与相应对照品峰的保留时间一致。（3）精密称取脑蛋白水解物对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含总氮6mg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD）测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（如：柱长250mm，内径4mm，粒径5μm）；以0.1%三氟醋酸溶液为流动相A；以0.085％三氟醋酸乙腈溶液－0.1%三氟醋酸溶液（80：20）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8ml；检测波

3、长为276nm。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）01000405050450100530100551000651000精密量取本品与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品溶液的色谱图与对照品溶液色谱图的相似度（扣除色氨酸峰后）不得低于0.9。【检查】酸碱度应为6.9～7.5（中国药典2010年版二部附录ⅥH）。溶液的澄清度与颜色取本品5瓶，依法检查（中国药典2010年版二部附录IXB和IXA第一法），溶液应澄清无色；如显色，与黄色6号标准比色液比较，均不得更

4、深。蛋白质取本品5ml，加20%磺基水杨酸溶液2ml，混匀，溶液应澄清。高分子杂质照分子排阻色谱法（中国药典2010年版二部附录VH）测定。色谱条件与系统适用性试验用亲水高效体积排阻硅胶为填充剂（如：TSKGEL2000SWxl，柱长300mm，内径7.8mm，粒径5μm；或性能相当的色谱柱）；以三氟醋酸-乙腈-水（0.05：40：60）为流动相，流速为每分钟0.7ml；检测波长为214nm。理论板数按核糖核酸酶A峰计算不得低于5000，各相邻峰之间的分离度按峰高与峰谷之比计算均不得小于3.0。标准曲线的制备取核糖核酸酶A(

5、分子量13700)、胰岛素(分子量5808)、胸腺肽α1(分子量3108)、生长激素释放抑制因子(分子量1638)各适量，分别用流动相溶解并定量制成每1ml中约含1mg的溶液作为分子量标准溶液。取上述标准溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样的保留时间相对偏差均不得大于2.0%。以各峰的保留时间为横坐标，分子量对数为纵坐标进行线性回归，相关系数不得小于0.99。测定法取本品适量，加流动相稀释制成每1ml中约含总氮1mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以面积归一化法计算，供试品溶液色谱图中分子量

6、大于5000道尔顿的高分子杂质的峰面积不得过1.0%。渗透压摩尔浓度取本品，依法检查（中国药典2010年版二部附录IXG），渗透压摩尔浓度应为300～600mOsmol/kg。活力测定取本品适量，加10%小牛血清培养液制成每1ml中含氮量为60µg的溶液。照活力测定法（见附）测定，修复率不得低于100%。异常毒性取本品，依法检查（中国药典2010年版二部附录XIC），按静脉注射法给药，应符合规定。过敏反应取本品，依法检查（中国药典2010年版二部附录XIK），应符合规定。细菌内毒素取本品，依法检查（中国药典2010年版二部附

7、录XIE），每1ml中含细菌内毒素的量应小于1.2EU。降压物质取本品，依法检查（中国药典2010年版二部附录XIG），剂量按猫体重每1kg注射2.0mg（按总氮计），应符合规定。其他应符合注射剂项下有关的各项规定（中国药典2010年版二部附录IB）。【含量测定】总氮取本品，加水稀释至适宜浓度，作为供试品溶液。精密量取适量，依法测定（中国药典2010年版二部附录VIID第二法），每1ml中含总氮应为5.49～6.71mg。总氨基酸取总氮测定项下供试品溶液，精密量取适量，置消化管中，加盐酸适量，充氮封口，置110℃水解20小时

8、，放冷，启封，置蒸发皿中，水浴蒸发至干，加水使残留物溶解并稀释至合适浓度，作为总氨基酸供试品溶液。用氨基酸分析仪或适宜的高效液相色谱仪进行测定。另取相应的氨基酸对照品（见下表），精密称定并稀释制成合适浓度，作为对照品溶液，同法测定。按外标法或以合适的氨基酸为内标以峰面积计算各氨基酸含量（以