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1、第29卷第2期湖南大学学报(自然科学版)Vo1.29,No.22002年4月JournalofHunanUniversity(NaturalSciencesEdition)Apr.2002文章编号:100022472(2002)0220036204X蛋白质的电化学特性研究张正奇,吕喜凤(湖南大学化学化工学院,湖南长沙410082)摘要:研究了蛋白质的极谱特性L在pH值为2166的B2R缓冲溶液中,当有01070molöLKCl存在时,BSA在-1.90V左右产生一良好的极-8-6谱波,利用此波可测定微量的BSA,线性范围为4.5×10～2.0×10-8molöL
2、,检测下限为2.7×10molöLL所提出的方法不经任何预处理可直接测定血清中的蛋白质L关键词:蛋白质;极谱法;牛血清白蛋白中图分类号:O657132文献标识码:AElectrochemicalCharacteristicsofProteinsZHANGZheng2qi,LüXi2feng(CollegeofChemistryandChemicalEngineering,HunanUniv,Changsha410082,China)Abstract:Thepolarographiccharacteristicsofproteinshavebeenstudied.
3、InapH2.66buffersolutioncontaining0.070molöLKCl,theBSAyieldsasensitivepolaro2-8graphicwaveat-1.90V,whichcanbeusedfordeterminationofproteinsdownto10molöL.TheelecerocapillarysshowthattheBSAisadsorbedonthemercuryelectrodeandthecyclicvoltammetriccurvesshowthattheelectrochemicalreactionofB
4、SAontheDMEisirreversible.Therecommendedprocedurewasusedtodeterminetheproteinsinserumsamples.Keywords:protein;polarography;BSA人类基因组序列分析提前完成后,蛋白质组学(proteome)研究引起了生命科学工作[1][2]者的极大关注.蛋白质分离与测定的新近进展已有综述.人体中血清蛋白质测定具有重要意义,是临床诊断的重要依据L人血清蛋白临床检验项目有血清总蛋白测定、白蛋白[3,4]测定、C2球蛋白测定、粘蛋白测定等L其中,总蛋白的测定方法主要
5、有凯氏定氮法、双缩脲法和折射法L凯氏定氮法操作繁琐,双缩脲法干扰较大,折射法不能用于总蛋白量少于35göL的样品测定L[5～8]近年,分光光度法测定血清蛋白质总量的报导较多L而用极谱法和伏安法测定蛋X收稿日期:2001212210作者简介:张正奇(1950-),男,湖南常宁人,湖南大学教授L第2期张正奇等:蛋白质的电化学特性研究37白质尚未见报导L本文研究用极谱法测定蛋白质L在含01070molöLKClpH为2.66的Britton2Robinson缓冲溶液中,蛋白质在-1.90V左右呈现一灵敏示波极谱波,利用此波-8可测定10molöL蛋白质L1实验部分11
6、1仪器与试剂JP21A型示波极谱仪(成都仪器厂);pHS23C型精密pH计(上海雷磁仪器厂);7821磁力加热搅拌器(金坛市医疗仪器厂);FSH22型可调高速匀浆器(江苏金坛大地自动化仪器厂和环保仪器厂)LC2球蛋白和人血清白蛋白(卫生部上海生物制品研究所);牛血清白蛋白(BSA):称取牛血清白蛋白(上海伯奥生物科技公司)66mg,加水溶解,稀释至10mL,浓度为110×-410molöL;质量控制血清(临床实验室用,卫生部上海生物制品研究所和卫生部临床诊断试剂中心),冻干L上述试剂均在4℃保存;Britton2Robinson(B2R)缓冲溶液;0.70mol
7、öLKCl溶液L其它试剂均为分析纯,实验过程中均使用二次蒸馏水L112实验方法移取0.20mLBSA溶液于10mL比色管中,加入2100mLpH为2.66的B2R缓冲溶液及1.0mL0.70molöLKCl溶液,用水稀释至10mL,放置20min,在JP21A型示波极谱仪上记录极谱图,测定-1.90V处导数波高L2结果与讨论211BSA极谱波在B2R溶液中,当pH值小于115时,观察不到极谱波,pH值在2.3～3.2之间时,BSA产生灵敏的极谱波;pH大于510时,极谱波消失L在pH值为2166的B2R缓冲溶液中,当有01070molöLKCl存在时,BSA在-
8、1.90V左右产生一良好
