AOAC官方分析方法 998_09

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1、17.9.24(g)底物－1小瓶(冻干)。含0.011g2,2’-氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻AOAC官方分析方法998.09唑啉-磺酸盐)和0.123gNaH2PO4⋅2H2O.复原的底物在2-8°C能稳定食品中沙门氏菌的检测保存2个月。采用氯化镁孔雀绿R10肉汤和四硫酸盐肉汤(TTB)培养基进行的比色(h)底物稀释液－1小瓶(22ml/瓶)。含0.116g柠檬酸，0.0011g双氧多克隆酶免疫分析筛选法水和0.0185gNaOH的水溶液。(TECRA沙门氏菌可视免疫分析法)(i)终止液－1小瓶(6ml/瓶)。含0.15gNaF的水溶液。(警告：勿用嘴首次发行19

2、98年吸液；避免皮肤直接接触。如溅出，将液体移入大口杯，用水稀释。用首次发行版修改1999年水稀释残留的溅出物。)最终发行2001年(j)冲洗液浓缩液－1小瓶(25ml/瓶)。含1.45gTris,7.03gNaCl,1.0g吐温和0.0025g工汞硫代水杨酸钠的水溶液。(此方法用于所有食品中沙门氏菌的筛选；由于多克隆抗体的使用可能(k)比色卡－肉眼判读阳性和阴性结果。会和少量非沙门氏菌细菌产生交叉反应。免疫分析法所检测的阳性结果(l)M肉汤－5.0g酵母提取物，12.5g胰蛋白胨，2.0g甘露糖，5.0必须进行生化和血清学确认)g无水柠檬酸钠，5.0gNaCl,5.

3、0g无水K2HPO4,0.14g无水MnCl2,0.8g无水MgSO4,0.04g无水FeSO4,和0.75g吐温80(购自见表998.09A-C支持此方法认可的实验室研究结果Difco)。悬浮在1L水中，然后加热煮沸1-2min。每16×125mm旋盖的试管中添加10ml。盖好盖子，121°C高温灭菌15min。盖紧盖子。A.原理最终pH应在7.0±0.2。这是一种用沙门氏菌的特异性抗原制备所得的高纯度抗体来检测沙门(m)诊断试剂－为推测性EIA检测阳性结果培养法确认所必须的，参氏菌抗原的酶免疫分析法。将沙门氏菌抗原的多克隆抗体吸附到96孔见967.25B(见17.

4、9.01).微孔盘。将肉汤培养基置入微孔中。如果存在沙门氏菌抗原，他们会和C.仪器吸附在孔穴内的特异性抗体结合。然后冲洗去所有其它材料。添加的接合剂会与结合到孔穴表面吸附抗体的抗原结合。冲洗去没有结合的接合(a)培养箱－35-37°C和41-43°C。剂，然后添加酶的底物。深蓝绿色指示沙门氏菌抗原的存在。(b)多量移液器－移取20和200µL用于免疫分析，1和0.1mL用于增菌培养。B.试剂(c)水浴－保持100°C。高压灭菌锅设在100°C是可接受的，用于产生试剂(a)-(m)TECRA沙门氏菌可视免疫分析法用的试剂来自TECRA国流动蒸汽。际公司。邮箱788，威洛

5、比，NSW,澳大利亚和国际BioProducts公司，(d)塑料挤瓶－500mL,用于分配冲洗液。自动清洗机可能使用。邮箱0746,Bothell,WA98041,美国。代替物必须预先检测其等效性。(f)酶免疫分析阅读器或双波长阅读器－可选。配有414±10nm滤光的(a)吸附在条板上的抗体－Removawell®条(Dynatech技术，14340光度计，或配有414±10nm和490±10nm滤光的双波长的阅读器，能SullyfieldCircle,Chantilly,VA20151-1683,美国)。沙门氏菌96孔上阅读微孔板。的多克隆抗体。不用时将多孔板于2-

6、8°C保存。D.使用说明(b)托盘－保证足够多孔穴和条板。(c)对照抗原－阳性控制(冻干).纯化的沙门氏菌抗原，和沙门氏菌试剂盒内的试剂不用时须冷藏，且为一次性使用。不要重复使用含抗体反应，1小瓶。复原的对照抗原保存在2-8°C时能稳定2个月。有食品，试剂或冲洗液的孔穴。(d)对照稀释液－1小瓶(6ml/瓶).含0.006gTris,0.044gNaCl,每组测试含有单个阳性和阴性对照抗原。所有对照必须正常，才能0.0025g吐温20和0.005g工汞硫代水杨酸钠。对照稀释液也作为阴确保实验正确。性控制。使用数据记录单来确认每个测试组分的位置，每个测试和试剂盒内(e)

7、接合剂－2小瓶(冻干)。含约150ng抗沙门氏菌抗体(来自羊)，能试剂需用单独移液器移取，以避免交叉污染。如果用塑料槽来分配接合和辣根过氧化物酶结合，0.00686gNa2B4O7⋅10H2O,0.12gSigma右剂和底物，确保它们是分开的。旋糖苷D9260(右旋糖苷蔗糖酶菌株B-512产生)，0.06g水解凝胶，试剂盒的试剂作为一个整体单元使用，不要混用不同批次的试剂。0.0024gCaCl2⋅2H2O和120ng工汞硫代水杨酸钠。复原的接合剂在E.悬浮液的制备2-8°C能稳定保存2个月。(a)预增菌－在非抑制性肉汤中预增菌产品以促使沙门氏菌属的