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《07_萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种的实时荧光定量PCR检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、江苏农业科学2007年第5期—65—萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种的实时荧光定量PCR检测李博,李金庆,尹燕妮,郭坚华(南京农业大学植物病理学系,江苏南京210095)摘要:依据萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种(Curtobacteriumflaccumfacienspv.beticola)的16S～23SrRNA间隔区ITS序列,设计引物CfbF/CfbR。PCR扩增3个糖甜菜叶斑菌及29个参比菌株,仅靶标菌扩增出191bp产物。2用SYRBGreenI荧光染料进行实时荧光定量PCR检测,制作标准曲线,回归直线决定系数R为0.99。整个检测过程操作便捷,仅需2h,可灵敏、特异、
2、定量地对该病原菌进行检测。关键词:萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种;实时荧光定量PCR;标准曲线中图分类号:S4351663文献标识码:A文章编号:1002-1302(2007)05-0065-04糖甜菜(Betavulgarisvar.saccharifera)是我国高,有些地块达100%,对糖甜菜的生产构成严重威[1]北方地区广泛种植的重要的糖料和饲料作物。萎蔫胁。目前糖甜菜叶斑病菌(BV)的检测仅依靠表短小杆菌糖甜菜致病变种(Curtobacteriumflaccumfa2型特征、生理生化特性、血清学反应等传统鉴定方cienspv.beticola)引起的糖甜菜叶斑病田
3、间发病率法,步骤繁琐、耗时耗力、灵敏度低且不稳定,不宜广泛应用。迫切需要建立一套灵敏、特异、快速的检测收稿日期:2007-03-22技术。基金项目:国家自然科学基金(编号:30571211);国家高技术研究发实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Ap2展计划资助项目(编号:2003AA249020)。pliedBiosystems公司推出,指在PCR反应体系中加作者简介:李博(1982—),男,河北怀来人,硕士生,研究方向为植入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR物病原细菌的分子检测。进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析通讯作者:郭坚华,教授,博导,从
4、事细菌分子检测和生物防治研究。的方法,近年来以其特异性强、灵敏度高、重复性好、E-mail:jhguo@njau.edu.cn。致谢:本研究得到浙江大学生物技术研究所马忠华教授的热情帮助,定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为分子生物在此表示衷心感谢。学研究中的重要工具,在mRNA表达的研究、DNA2(上接第64页)kg/667m纯氮作促花肥。(5)化学除草。在播种后213农艺性状出苗前用乙草胺进行土壤封闭,也可在杂草3叶期江蔬1号系有限结荚习性,全生育期91d,紫用盖草能加虎威对水喷雾。花,灰毛,株高37cm,结荚高度5.3cm,主茎节数参考文献:5.3节,有效分枝数
5、4.4个,每株结荚29.8个,每荚1.7粒,标准荚389个/kg。该品种百粒鲜重68.86[1]陈新,唐浩,严继勇,等.江苏省的菜用大豆新品种及其高产g,出仁率52.94%,豆仁口感,香甜柔糯。栽培技术研究[J].中国农学通报,2006(6):265-268.[2]王幸,王宗标,张祖明,等.鲜食大豆徐春1号的选育与高产栽214栽培要点培技术[J].江苏农业科学,2006(1):42.(1)精选种子。准备播种用的种子,采用机械[3]智海剑,盖钧镒,喻德跃,等.黑大豆新品种南农26的选育和高或人工选种,去除各种杂粒,并在播种前晒种1～2产栽培技术[J].江苏农业科学,200
6、6(4):28-29.d。(2)适期播种。地膜覆盖在3月20日左右,露[4]陈新,严继勇,高兵,等.早熟鲜食大豆品种早生翠鸟的特征地直播4月5日左右。(3)合理种植。一般种植密特性及栽培技术[J].江苏农业科学,2006(6):262-263.2[5]陈新,严继勇,高兵,等.早毛豆新品种早选3号及无公害栽度8000株/667m,行株距40cm×20cm,有条件的培技术[J].中国油料作物学报,2004,26(3):87-89.地方可搞垄作栽培,垄高23～27cm,垄距50cm,株[6]陈新,严继勇,高兵.菜用大豆新品种———日本晴3号[J].2距17cm。(4)肥水运筹
7、。纯氮6.9kg/667m,纯磷中国蔬菜,2004(3):59.226.49kg/667m,纯钾5.2kg/667m,开花期追施4.6—66—江苏农业科学2007年第5期拷贝数的检测、单核苷酸多态性(SNPs)的测定等方表1供试菌株[2]面都有广泛应用。目前国内外运用该技术进行菌株编号供试菌株来源[3]检测的植物病原物有菜豆细菌性萎蔫病菌、梨火1萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种(BV1)内蒙古疫病菌[4]、苜蓿萎蔫病菌[5]、水稻白叶枯病菌及水2萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种(BV2)内蒙古3萎蔫短小杆菌糖甜菜致病变种(BV3)内蒙古[6][7]稻
