资源描述：
《ISSR分子标记及其在植物分子生物学中的应用_陈龙》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、综述陈龙等:ISSR分子标记及其在植物分子生物学中的应用ISSR分子标记及其在植物分子生物学中的应用陈龙,王家良,杨贤松(蚌埠学院食品与生物工程系,安徽蚌埠233030)ISSRPolymorphismandItsApplicationinPlantMolecularBiologyCHENLong,WANGJia2liang,YANGXian2song[4]摘要:ISSR分子标记是在PCR基础上发展起来的一种DNA多(CT)n等二核苷酸重复序列。ISSR分子标记是一态性检测技术。其基本原理就是在SSR的3’或5’端锚定1～种新型的简单序列重
2、复区间DNA扩增多态性检测技4个核苷酸,然后对反向排列SSR间的一段DNA进行PCR扩术,它的生物学基础仍然是基因组中存在的SSR。增,而不是扩增SSR本身。ISSR分子标记通常为显性标记,呈ISSR技术的基本原理就是在SSR(通常16～25bp长)孟德尔式遗传,具有简便、快速、稳定、DNA多态性高等优点。的3’或5’端锚定1～4个碱基,作为引物,对两侧具有目前,在植物遗传多样性、系统发育、品种鉴定、基因定位、遗传作图等研究中已得到广泛的应用。反向排列SSR间的一段DNA进行PCR扩增,而不是[5]关键词:ISSR;植物分子生物学;应用扩增
3、SSR本身(图1)。SSR的3’或5’端锚定的优+中图分类号:Q7;S339.31文献标志码:A点是在基因组上只有与锚定的核苷酸匹配的位点才能文章编号:100124705(2007)1020049204被靶定,因而避免了SSR在基因组中的滑动,大大地[6]提高了PCR扩增的专一性。20世纪90年代以来,基于PCR的DNA分子标记,如随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpolymor2phismDNA,RAPD)、扩增片段长度多态性(amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP)、简单重复序
4、列(simplesequencerepeat,SSR)又称之为微卫星(micro2[1]satellite)等在植物研究中得到广泛应用。但RAPD重复性低,AFLP费用昂贵,SSR引物设计费时耗力,使得它们的应用受到一定程度的限制。简单重复间序列(inter2simplesequencerepeat,ISSR)因克服了上述DNA分子标记的缺点而迅速被应用于植物遗传多样性、系统发育、品种鉴定、基因定位、遗传作图等研究[2][2]中。本文将简要介绍ISSR技术的原理、特点及其在图1ISSR2PCR示意图植物分子生物学研究中的应用。用重复序列(A
5、G)8作单引物,(1)引物(AG)8没1ISSR技术的原理和特点有被锚定,最终形成拖带现象;(2)引物(AG)8在3’端被2个核苷酸(NN)锚定,结果产生清晰的条带;1.1原理(3)引物(AG)8在5’端被2个核苷酸(NN)锚定,结在真核生物基因组中均存在着由1～4个核苷酸果产生清晰而较长的条带。组成的简单重复序列(simplesequencerepeat,[3]1.2特点SSR),如(A)n、(AG)n、(AGC)n、(AATT)n等。植ISSR技术的主要优点有:(1)ISSR分子标记通常物基因组中最多的SSR是(AT)n、(TA)n、(
6、GA)n、为显性标记,呈孟德尔式遗传,具有很好的稳定性和多[7,8]态性;(2)DNA用量少,引物设计容易,实验成本低[9]廉;(3)操作过程简单、快速、高效,不需使用放射性收稿日期:2007206225基金项目:蚌埠学院科研项目资助(BBXY20062204A)。同位素;(4)引物较长,通常为16～25bp,而RAPD的作者简介:陈龙(1983-),男,安徽庐江人;助教,主要从事食品与生物工程方面的研究。引物只有10bp;(5)PCR扩增时的退火温度较高,通·49·第26卷第10期2007年10月种子(Seed)Vol.26No.10Oc
7、t.2007[18]常为45～65℃,从而保证了PCR扩增的可重复性。已成功应用于研究植物种内、种间遗传变异情况。但ISSR技术与RAPD相似,主要缺点是ISSR标在水稻、小麦、大麦、高粱、甘薯、鹰嘴豆、啤酒花、茶、羽记为显性遗传标记,不能区分显性纯合基因型和杂合扇豆、葡萄、马铃薯、小扁豆、黑麦草、菜豆、番茄、大车基因型。ISSR技术的操作也与RAPD非常相似,主要前、杏、枳、欧洲油菜、豌豆、豇豆、画眉草等植物中均有[2][19]包括DNA提取、PCR扩增、电泳检测、数据统计分析等报道。Danilova等用ISSR标记研究了26个俄罗步骤。
8、但ISSR产物多态性远比RAPD、SSR丰富,而斯和欧洲啤酒花品种,用21个引物扩增了183条带,[10,11]且比RAPD技术更加稳定可靠,重复性更好。其中多态性带106条,占
