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《弓形虫分子生物学诊断和基因型鉴定的研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·292·JournalofTropicalMedicineVol.7No.3Mar.2007[文章编号]1672-3619(2007)03-0292-04·综述·弓形虫分子生物学诊断和基因型鉴定的研究进展张翰,廖申权,宋慧群,朱兴全*(华南农业大学兽医寄生虫学研究室,广州510642)【摘要】弓形虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,严重危害人体健康并给全世界的畜牧业造成巨大的经济损失。但弓形虫病缺乏特异性临床症状和体征,诊断较为困难。传统的检测方法如病原学诊断、免疫学检测等费时且不够稳定。而以核酸扩增技术为基础的分子生物学技术的迅速发展,如实时定量PCR
2、(RT-PCR)、巢式-PCR和PCR-RFLP等的应用,不仅为弓形虫病的诊断提供了快速、灵敏、特异及稳定的检测方法,而且通过对病原基因型的分析鉴定为弓形虫群体生物学、流行病学、疫苗研究及对基因型和疾病模式之间潜在的相关性研究等提供重要的依据。【关键词】弓形虫病;分子生物学技术;诊断;基因分型中图分类号:R531.8文献标识码:A弓形虫病是一种由刚第弓形虫引起的呈世界性分布准确性[6,7]。的人兽共患寄生虫病,严重危害人体健康且给全世界的畜可动遗传因子(MGEs)是一个具有高度变异性的重复牧业造成很大的经济损失[1]。但人和动物的弓形虫病缺乏序列,它在每个细胞中
3、有100～500个拷贝,曾被用于样品中特异性临床症状和体征,诊断较为困难。传统的检测方法虫株型的鉴定[8],但是没有被广泛采用。其它的一些单拷贝有病原学诊断、免疫学检测等。其中病原学的诊断方法最的序列,包括SAG1、SAG2、SAG3、SAG4和GRA4等[9-12],亦为可靠,但费时且易漏检;免疫学方法临床上使用较为普应用于实验室的PCR研究。弓形虫ITS序列已被作为分子遍,但因抗原含量少,抗体出现较晚,不适合感染的早期检标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定[13,14],并显示了其测和对免疫功能缺陷患者的诊断。而以核酸扩增技术为基高敏感性和高特异性。础的分子生
4、物学技术的迅速发展,不仅为弓形虫病的诊断1.2弓形虫的分子诊断方法提供了快速、灵敏、特异及稳定的检测方法,而且通过对病相对于靶基因的多样性,弓形虫的分子诊断方法也逐原基因型的分析鉴定,为弓形虫群体生物学、流行病学、疫渐的多样化。以常规PCR方法为基础,近年来又发展了巢苗研究及对基因型和疾病模式之间潜在的相关性研究等式PCR(nestedPCR)、RT-PCR、PCR-ELISA以及免疫PCR提供重要的依据。本文就弓形虫病分子生物学诊断和基因(I-PCR)等技术,并逐步在弓形虫病诊断中得以应用,进型鉴定的研究进展作一综述。一步提高了PCR方法的敏感性和特异性。常规
5、PCR方法操作简单,所需时间短,是一种敏感、1分子生物学方法在诊断弓形虫病上的应用快速、特异的检测技术。VANDEVEN等[3]以B1基因作为1.1弓形虫种特异性遗传标记靶基因通过体外扩增检测临床上不同的病理组织和标本,目前,在弓形虫病的诊断和检测中,使用最多的特异并且与传统的弓形虫检测方法进行了比较,认为PCR方性遗传标记是B1基因和529bp序列。B1基因由BURG法是对弓形虫感染诊断的很有价值的理想手段。相似的方等[2]在1989年首次鉴定,其基因组中有35个拷贝,具有法被HOHLFELD等[4]用于先天性弓形虫病的产前诊断。结公认的高度特异性,用其建立的
6、PCR方法检测弓形虫具果表明,常规的检测方法敏感度为89.5%,而PCR方法的有高度的敏感性和特异性[3,4]。HOMAN等[5]将含有约300敏感度为97.4%,并且操作简单,所需时间短。谢德华等个拷贝的529bp序列用于弓形虫的鉴定,并证明这一段[14]以ITS-1作为弓形虫种特异的遗传标记,建立了猪弓形529bp序列具有高度的特异性,发展为实时定量PCR(RT-虫病特异PCR诊断方法,最低能检测到10个弓形虫速殖PCR)方法,用529bp序列比B1基因具有更高的敏感性和子的DNA。与ELISA和IHA等血清学方法相比,该PCR方法的检出时间早,检测结果能直
7、接反映现症感染。而JAUREGUI等[13]以弓形虫ITS-1为靶基因建立的PCR方基金项目:广东省自然科学基金团队项目(No.05200638);广东省科技计划项目(No.2004B20201008)。法具有更高的灵敏性,可检测到一个速殖子。作者简介:张翰,男,在读硕士研究生。巢式PCR是在常规PCR方法基础上发展的一种新方*通讯作者:朱兴全,男,教授,研究方向为寄生虫功能基因组学法,它利用内外两对引物先后扩增,可从极少量的模板中获及分子生物学,E-mail:xingquanzh@scau.edu.cn得较高浓度和纯度的靶片段,从而提高了敏感性,并可应用热带医
8、学杂志2007年3月第7
