气相和高效液相色谱法测定油菜籽(饼)中硫代葡萄糖甙

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1、研究报告气相和高效液相色谱法测定油菜籽（饼）中的硫代葡萄糖甙*吴谋成熊时中袁俊华周永明牟同敏（华中农业大学中心实验室，武汉）[提要]本文报道气相色谱和高效液相色谱法测定油菜籽（饼）中硫代葡萄糖甙的样品预处理技术和测试技术。气相色谱法采用氢焰离子化检测器，3mm1.6m玻璃柱，2％OV-1或2％OV-7固定液，ChromosorbWAWDMCS担体（60—80目）。高效液相色谱采用4mm250mm不锈钢柱，柱内填充YWG-C18H37(10m2)。流动相为3％乙腈，UV-220nm检测。GC和HPL

2、C测定结果一致。与经典重量法对照，总量绝对误差小于1.12mol/。气相和液相色谱重复性试验，总量的标准偏差分别为0.10和0.67。首次指出我国油菜含有吲胚哚类硫代葡萄糖甙和大致含量。油莱是我国的主要油料作物。油菜籽指出，TMS法重现性差，对同一样品测定（饼）中含有硫代葡萄糖甙（Glucosinola-结果差异颇大。因此，许多学者正致力于tes，以下简称硫甙），它在内源芥子酶的作HPLC的研究[6-13]。用下，水解成恶唑烷硫酮、异硫氰酸盐、腈本文着重讨论样品制备技术，TMS法等有毒物质，影响了

3、油菜饼的品质。国内外重现性差的原因，GC和HPLC的色谱条件。育种工作者正致力于培育低硫甙品种，以提在仅有烯丙基硫甙的情况下，对各峰进行定高油菜籽（饼）的食用及饲用质量。因此，性和修订定量校正因子。研究了我国甘蓝硫甙的测试技术是国内外的重要研究课题。型、白菜型、芥菜型油菜的主要硫甙组成，我国已将其列入“七五”国家重点攻关项特别是国内尚未研究过的吲胚哚类硫甙的种类目。和含量范围。兹将研究结果报道如下。硫甙的测定，分为总量和各组分的测定。我们曾提出过作为育种学家筛选育种材实验方法料的总量测定方法[1,

4、2]。但是，深入的研究（一）试剂要求我们对硫甙各组分进行准确的测定。DEAE-SephadexA-25，Pharmacia进硫甙各组分的测定，Thies[3,4]提出用口分装；烯丙基硫甙，AldrichChemical离子交换树脂将样品中硫甙进行富集、分Company,USA;BSTFA,E.Merck.离，用硫酸酯酶脱掉硫甙中的硫酸根，制备冰乙酸、醋酸铅、醋酸钡、乙腈、TMS衍生物，用气相色谱测定（简称TMSTMCS、吡啶均为AR，上海试剂一厂出品。法），使TMS法成为各国通用的分析方（二）色谱

5、分析条件法[3-5]。但是TMS法不能测定易于热解的硫气相色谱采用氢焰离子化检测器；3mm甙，如吲哚类硫甙。据Roger(1982)报道，在1.6m玻璃柱，2％ꕏOV-1或2％ꕏOV-7固定甘蓝型油菜中，吲哚类硫甙约含14mol/g，液，ChromosorbWAWDMCS担体（60油菜品质育种仍不能忽视。此外，在1983年巴黎国际油菜分析化学会议上，B.Uppstǒm＊本文摘要曾在第六次全国色谱学术报告会宣读过，-80目）；程序升温：初始温度190，终止次，再用2—4ml水洗二次。加入lml0.2

6、％硫温度280，升温速率3/min；进样口谖温度：酸酯酶（H-1型），待近干时，塞紧塞子，300；载气流速：N230ml/min，H250ml/放置过夜。每次用1ml水，连续淋洗色谱柱min，空气500ml/min。高效液相色谱采用4次。将淋洗液合并，摇匀后供测定用。紫外检测器，检测波长220nm；4mm3.液相色谱测定和结果的计算：取10250mm不锈钢柱，柱内填畛充YWG-C18H37—20l制备液按液相色谱条件进样分析。按(10m2)；流动相为3％乙腈，流速2.5ml下式计算硫甙含量。/mi

7、n。（三）材料及样品的预处理和测定1.DEAE-SephadexA-25柱的制备：将5gDEAE-SephadexA-25置于250ml烧杯中，加入50m1水，浸泡24小时以表1校正系数表上备用。用玻璃纤维塞入8150mm层析柱的底部，加入少量水于柱中，用滴管吸入少量浸泡好了的DEAE-SephadexA-25，沿柱壁注入柱内，制成一个高约1mm的层析柱（相当于100mg），待水面快要接近柱面时，盖上塞子，以防水全部流干。2．样品制备：准确称取脱脂样品0200g于10m1离心管中，加沸水4ml，在

8、沸水浴中提取5分钟。冷后加入内标烯丙基硫甙标准溶液1m1(1.5mo1/ml)，摇匀。加0.5ml浓如样品中含有内标硫甙，采用内加标准度为0.5mo1/L的Ba(Ac)2—Pb(Ac)2溶液，法，对内标峰面积作校正，操作如下：水浴上温热，稍冷后离心5分钟（3000r/称取重量相同的同一样品两份，一份加min）。吸取上清液2.5m1放入DEAE-入内标，另一份不加内标。在同一条件下测SephadexA-25层析柱中，当柱子流干后，定，按下式求出样品中原有的烯丙基硫甙的用2—5m10.