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时间:2019-06-01
《气相和高效液相色谱法测定油菜籽(饼)中硫代葡萄糖甙》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、研究报告气相和高效液相色谱法测定油菜籽(饼)中的硫代葡萄糖甙*吴谋成熊时中袁俊华周永明牟同敏(华中农业大学中心实验室,武汉)[提要]本文报道气相色谱和高效液相色谱法测定油菜籽(饼)中硫代葡萄糖甙的样品预处理技术和测试技术。气相色谱法采用氢焰离子化检测器,3mm1.6m玻璃柱,2%OV-1或2%OV-7固定液,ChromosorbWAWDMCS担体(60—80目)。高效液相色谱采用4mm250mm不锈钢柱,柱内填充YWG-C18H37(10m2)。流动相为3%乙腈,UV-220nm检测。GC和HPL
2、C测定结果一致。与经典重量法对照,总量绝对误差小于1.12mol/。气相和液相色谱重复性试验,总量的标准偏差分别为0.10和0.67。首次指出我国油菜含有吲胚哚类硫代葡萄糖甙和大致含量。油莱是我国的主要油料作物。油菜籽指出,TMS法重现性差,对同一样品测定(饼)中含有硫代葡萄糖甙(Glucosinola-结果差异颇大。因此,许多学者正致力于tes,以下简称硫甙),它在内源芥子酶的作HPLC的研究[6-13]。用下,水解成恶唑烷硫酮、异硫氰酸盐、腈本文着重讨论样品制备技术,TMS法等有毒物质,影响了
3、油菜饼的品质。国内外重现性差的原因,GC和HPLC的色谱条件。育种工作者正致力于培育低硫甙品种,以提在仅有烯丙基硫甙的情况下,对各峰进行定高油菜籽(饼)的食用及饲用质量。因此,性和修订定量校正因子。研究了我国甘蓝硫甙的测试技术是国内外的重要研究课题。型、白菜型、芥菜型油菜的主要硫甙组成,我国已将其列入“七五”国家重点攻关项特别是国内尚未研究过的吲胚哚类硫甙的种类目。和含量范围。兹将研究结果报道如下。硫甙的测定,分为总量和各组分的测定。我们曾提出过作为育种学家筛选育种材实验方法料的总量测定方法[1,
4、2]。但是,深入的研究(一)试剂要求我们对硫甙各组分进行准确的测定。DEAE-SephadexA-25,Pharmacia进硫甙各组分的测定,Thies[3,4]提出用口分装;烯丙基硫甙,AldrichChemical离子交换树脂将样品中硫甙进行富集、分Company,USA;BSTFA,E.Merck.离,用硫酸酯酶脱掉硫甙中的硫酸根,制备冰乙酸、醋酸铅、醋酸钡、乙腈、TMS衍生物,用气相色谱测定(简称TMSTMCS、吡啶均为AR,上海试剂一厂出品。法),使TMS法成为各国通用的分析方(二)色谱
5、分析条件法[3-5]。但是TMS法不能测定易于热解的硫气相色谱采用氢焰离子化检测器;3mm甙,如吲哚类硫甙。据Roger(1982)报道,在1.6m玻璃柱,2%ꕏOV-1或2%ꕏOV-7固定甘蓝型油菜中,吲哚类硫甙约含14mol/g,液,ChromosorbWAWDMCS担体(60油菜品质育种仍不能忽视。此外,在1983年巴黎国际油菜分析化学会议上,B.Uppstǒm*本文摘要曾在第六次全国色谱学术报告会宣读过,-80目);程序升温:初始温度190,终止次,再用2—4ml水洗二次。加入lml0.2
6、%硫温度280,升温速率3/min;进样口谖温度:酸酯酶(H-1型),待近干时,塞紧塞子,300;载气流速:N230ml/min,H250ml/放置过夜。每次用1ml水,连续淋洗色谱柱min,空气500ml/min。高效液相色谱采用4次。将淋洗液合并,摇匀后供测定用。紫外检测器,检测波长220nm;4mm3.液相色谱测定和结果的计算:取10250mm不锈钢柱,柱内填畛充YWG-C18H37—20l制备液按液相色谱条件进样分析。按(10m2);流动相为3%乙腈,流速2.5ml下式计算硫甙含量。/mi
7、n。(三)材料及样品的预处理和测定1.DEAE-SephadexA-25柱的制备:将5gDEAE-SephadexA-25置于250ml烧杯中,加入50m1水,浸泡24小时以表1校正系数表上备用。用玻璃纤维塞入8150mm层析柱的底部,加入少量水于柱中,用滴管吸入少量浸泡好了的DEAE-SephadexA-25,沿柱壁注入柱内,制成一个高约1mm的层析柱(相当于100mg),待水面快要接近柱面时,盖上塞子,以防水全部流干。2.样品制备:准确称取脱脂样品0200g于10m1离心管中,加沸水4ml,在
8、沸水浴中提取5分钟。冷后加入内标烯丙基硫甙标准溶液1m1(1.5mo1/ml),摇匀。加0.5ml浓如样品中含有内标硫甙,采用内加标准度为0.5mo1/L的Ba(Ac)2—Pb(Ac)2溶液,法,对内标峰面积作校正,操作如下:水浴上温热,稍冷后离心5分钟(3000r/称取重量相同的同一样品两份,一份加min)。吸取上清液2.5m1放入DEAE-入内标,另一份不加内标。在同一条件下测SephadexA-25层析柱中,当柱子流干后,定,按下式求出样品中原有的烯丙基硫甙的用2—5m10.
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