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《固定化米糠脂肪酶的制备及生化性賍之研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、固定化米糠脂肪酶的製備及生化性質之研究KUAS-93-CH-003＊曾清桂國立高雄應用科技大學化工系Abstract前言Anaturallyoccurringimmobilizedricebranlipase(IRB-L)脂肪酶普遍存在於動物、植物、真菌類及細菌體內。由preparedbyasimplyprocessofdefattingforricebranwith於脂肪酶具有獨特的基質特異性、位置選擇性以及立體選擇organicsolventhasbeensuccessfullydeveloped.Lowoil性,
2、除了可進行水解反應外,在醇類環境下還可進行酯化反extractionpossessedhighactivityoflipasewasobservedwhen應或轉酯化反應,應用範圍非常廣泛,而為工業上重要的酵theextractionratioofacetonetoricebranwas20:1usedto素之一。米糠含有大量油脂（米糠油）以及脂肪酶的存在,但defat.ThehydrolyticactivityofIRB-Lincreasedfrom3.87U/g由於水溶性脂肪酶的安定性欠佳以及無法重複回收再使用等t
3、o12.8U/gattheoptimumpH10andtemperature80℃.IRB-L缺點。因此,若能由處理後的米糠中得到一種安定性佳,且retained72%ofitsinitialactivityafter5batchhydrolytic可重複回收再利用的固定化酵素,將可降低在應用上的成cycles.After40daysofstorageat40℃or4℃,theresidual本。activityoftheIRB-Lwas81%.Inaddition,about80%of本研究計畫的主要目標為利用一簡單
4、的去脂程序由米糠conversionwasachievedwhenIRB-Lusedasabiocatalystto中製備出一種固定化脂肪酶,並進行其各種生化性質,如水hydrolyzethesoybeanoilandwasteoilfor12hrand72hr,解反應活性,最佳水解反應條件、儲存在不同環境下的安定respectively.性以及酵素動力學研究。本計畫亦將利用所得的固定化脂肪摘要酶應用於黃豆油及廢油水解反應,並探討其活性。本研究是利用碾米過後的米糠經過一些特殊處理後，可將米實驗糠中所含之油脂去除並將脂肪
5、分解酶保留，形成一種不需經（一）IRB-L的製備：過固定化步驟就能形成之天然固定化酵素(immobilized為了得到活性較高的脂肪酶,米糠的去脂程序非常重rice-branlipase;IRB-L)。研究中發現，20：1（v/w）要。本研究中採用與Prabhu等人類似的方法進行去脂，亦即的米糠以丙酮於40℃下進行脫油處理5分鐘後可獲得最高以10克米糠在200ml的不同有機溶劑在30℃下進行去脂,的固定化酵素活性12.8U/g。在生化性質探討方面，其最適並於不同時間下進行取樣,以HPLC分析油脂的含量；殘渣則水解反應p
6、H值和溫度分別為pH=10和80℃。經由研究得知，以P-NPP測定脂肪酶的活性。在本研究中將採用異丙醇IRB-L在批次水解反應下重複使用了5次之後，仍維持了72%（IPA）、、DMSO（DimethylSulfoxide）、MCH（methyl的活性。在儲存安定性方面，固定化酵素可以在40℃的環境cyclohexane）、丙酮（acetone）、正己烷（hexane）、乙酸乙下保存40天仍維持80%以上的活性。使用10%(wt%)的固定酯（EA）及PGME（PripyleneGlycolMonomethyleEther
7、）化酵素分別與黃豆油(12小時)及食用廢油(48小時)進行水等有機溶劑進行去脂。解反應，皆可達到80%的轉化率。本研究中以P-NitrophenylPalmitate（P-NPP）當作基質以進行脂肪酶水解反應活性之測定。P-Nitrophenol在水溶液中呈黃色,因此當P-NPP被脂肪酶水解後,P-Nitrophenol與脂肪酸分離而使溶液呈黃色,且隨著P-Nitrophenol濃度增加,溶液的黃色會加深。利用反應液量，計算廢油的轉化率。於OD410的吸光值可利用公式算出其活性。結果與討論（二）IRB-L的生化性質探討
8、：（一）IRB-L的製備：為了瞭解以上述方法所得的IRB-L其生化性質以及酵素本研究是以五種方法來探討米糠中各部分的活性，五安定性,因此將IRB-L在不同反應條件下進行生化性質以及個方法依序如下：1.米糠直接研磨後冷凍乾燥；2.米糠以丙安定性的探討。探討的項目及順序分列如下：酮萃取後所得到的懸浮液經真空過濾及冷凍乾燥後所得到的1.
