资源描述：
《羟基红花黄色素A抑制新生血管形成的机制研究_张前》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、2004年5月第27卷第3期北京中医药大学学报May2004,Vol.27,No.3JournalofBeijingUniversityofTCM·25·3羟基红花黄色素A抑制新生血管形成的机制研究111212张前牛欣闫妍金鸣杨向竹李金荣(1北京中医药大学基础医学院分子生物学实验室北京100029)XX(2北京市心肺血管疾病研究所药理研究室北京100029)摘要:目的从中药中寻找新的血管生成抑制剂,并探讨其抑制新生血管生成的作用机理。方法从红花中提取分离羟基红花黄色素A,利用鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察羟基红花黄色素A
2、对新生血管的抑制作用,并通过RT2PCR实验,观察羟基红花黄色素A对CAM组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体(VEGF2R)(flt21)mRNA表达的影响。结果提取出的羟基红花黄色素A纯度达到了9819%,浓度为0159gPL的羟基红花黄色素A能使CAM血管数明显变细减少(P<0101)并能显著抑制CAM组织中bFGF、VEGF及VEGF2R(flt21)的mRNA表达(P<0105)。结论通过本实验我们首次得出羟基红花黄色素A能显著抑制CAM新生血管生成,其作用机制之
3、一是通过抑制bFGF、VEGF及VEGF2R(flt21)的mRNA表达来实现的,提示羟基红花黄色素A可能是一很有潜力的血管生成抑制剂。关键词:羟基红花黄色素A;血管内皮细胞生长因子;碱性成纤维细胞生长因子;鸡胚尿囊膜;血管生成抑制剂中图分类号:R28515肿瘤的生长需要血管为之提供营养和排除代谢为新疆维吾尔族自治区吉木萨尔县。D24020型非产物。如果没有新生血管的形成,肿瘤可长期只处极性大孔树脂为天津南开大学化工厂产品;新鲜白[1]于1～2mm的微小状态。肿瘤血管的形成受诸多皮种蛋购自北京农业大学、无菌明胶海绵购自
4、中日促血管生长因子的调节,其中血管内皮细胞生长因友好医院;血管内皮细胞生长因子(VEGF)(Peprotech子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是刺公司);苏拉明(Sigma公司);TRIzol试剂(Gibco公激血管内皮细胞增殖、迁移和形成血管的两个最主司);M2MLV逆转录酶、PCR试剂(Promega公司);引[2、3]要的因子。抑制肿瘤血管的生成已成为目前国物由奥科公司合成。际上治疗癌症的新热点,特别是从天然药物中寻找112仪器血管生成抑制剂、探讨其作用机制已越来越来成为高效液相色谱仪(日本岛津
5、公司);高速冷冻离研究的重点。心机(德国SIGMA公司);图像摄录分析系统(法国为深入研究中药抗肿瘤的作用机理,获取具有ampharmacia公司);PCR仪(德国MJ公司)。生物学活性的血管生成抑制剂,我们建立了非极性113实验方法大孔树脂柱层析法,从活血化瘀中药红花中提取分11311羟基红花黄色素A的制备离了羟基红花黄色素A,由于鸡胚尿囊膜富含新生参考文献[4]方法并加以改进:取红花生药冷血管,因此我们首先通过鸡胚尿囊膜血管形成实验浸、减压浓缩过滤所得红花水提液上D24020型非极观察其对新生血管的抑制作用,并通过
6、RT-PCR实性大孔树脂柱,水洗脱糖类等杂质至Molish反应阴验从分子水平探讨其作用机制。性后以10%乙醇洗脱,经聚酰胺薄膜层析法监测,1材料与方法收集红花富含羟基红花黄色素A成分的洗脱液,50111药品与试剂℃减压浓缩,所得浓缩液上SephadexLH220葡聚糖红花生药购自新疆乌鲁木齐药材公司为菊科植凝胶层析柱,蒸馏水洗脱以聚酰胺薄膜层析法监测,物药用红花CarthamustinctoriusL1的干燥花,产地收集羟基红花黄色素A流分,经高效液相分析层析X张前,女,42岁,在读医学博士生,助理研究员X高等学校博士
7、学科点专项科研基金资助项目(No.200027),国家中医药管理局留学回国人员资助项目(B类)·26·北京中医药大学学报2004年第27卷产物进行质量控制,50℃减压浓缩冷冻保存备用。CGAAG-3′,下游5′-TTCACATCTGCAAGTGCG将提取出的羟基红花黄色素A分为大剂量组:CTCG-3′扩增长度为466bp。VEGF2R(flt21)引物24170gPL、中剂量组:2135gPL、小剂量组:0159gPL、极μL:上游5′-CTTTCAACCTGAAAACTGGCAGCA小剂量组:0129gPL4个浓度,
8、用0122μm的无菌滤-3′,下游5′-GCCTTTTTGTTGCAGTGCTCACC器滤过后备用。-3′扩增长度为508bp。bFGF引物2μL:上游5′-11312鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验CTTCAAGGACCCCAAGCGGCTC-3′,下游5′-(1)开窗:参考文献[5]方法。种蛋孵育至第6CAGTTTTTGGTCCGG
