BJS 201702 原料乳及液态乳中舒巴坦的测定

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1、附件2原料乳及液态乳中舒巴坦的测定BJS2017021范围本标准规定了原料乳及液态乳中舒巴坦的高效液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于原料乳及液态乳（酸奶除外）中舒巴坦的测定。2原理原料乳或液态乳用酸性水溶液超声提取，离心后上清液用固相萃取小柱净化，经液相色谱-串联质谱法测定和确证，外标法定量。3试剂和材料注：水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.2乙腈（CH3CN)：色谱纯。3.1.3乙酸（CH3COOH）：分析纯。3.2舒巴坦标准品舒巴坦标准品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1，纯度≥99%。表1舒巴坦标准品的中文

2、名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量舒巴坦Sulbactam68373-14-8C8H11NO5S233.243.3标准溶液配制3.3.1舒巴坦标准储备液：称取舒巴坦标准品（3.2）0.01g（精确至0.0001g），用水溶解并定容至100mL，标准储备液的浓度为0.1mg/mL，贮存于4℃冰箱中，有效期3个月。3.3.2舒巴坦标准工作液：吸取舒巴坦标准储备液（3.3.1）1.00mL于100mL的容量瓶中，用水定容至刻度，配得浓度为1.0μg/mL的标准工作溶液，此溶液现配现用。3.40.2%乙酸水溶液：准确量取2mL乙酸

3、（3.1.3），用水定容至1000mL。3.5HLB固相萃取小柱，200mg/6mL，或相当者。3.6微孔滤膜，0.22µm，有机相。4仪器和设备4.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。4.2超声波清洗器。4.3涡旋混合仪。4.4分析天平：感量分别为0.01g和0.0001g。4.5氮吹仪。4.6离心机：转速≥8000r/min。——18—5分析步骤5.1试样制备5.1.1提取称取试样5g（精确至0.01g），至25mL比色管中，加入15mL0.2%乙酸水溶液（3.4），涡旋30s，超声提取20min，用0.2%乙酸水溶液（3.4）定容至25mL，涡旋混匀，转移至

4、50mL离心管内，8000r/min离心10min，取上清液待净化。5.1.2净化HLB固相萃取小柱（3.5）预先用5mL甲醇（3.1.1）和5mL0.2%乙酸水溶液（3.4）进行活化，取10mL离心上清液（5.1.1）流经小柱，待上清液自然流尽后，用5mL0.2%乙酸水溶液（3.4）淋洗，用吸耳球吹出小柱中残留液体，加5mL甲醇（3.1.1）洗脱，收集洗脱液，采用氮气将洗脱液缓慢吹干，准确吸取2mL水溶解残渣，经0.22μm滤膜（3.6）过滤作为测定液，用液相色谱-串联质谱仪测定。5.2空白试验除不加试样外，均按5.1测定步骤进行。5.3仪器参考条件5.3.1液相色谱分离条件a

5、）色谱柱：C18色谱柱，50mm×4.6mm（i.d.），1.8µm，或性能相当者。b）流动相：A：水，B：乙腈（3.1.2），梯度洗脱条件见表2。c）柱温：25℃。d）流速：0.3mL/min。e）进样量：20µL。表2梯度洗脱表时间（min）流动相A（%）流动相B（%）流速（mL/min）0.09550.31.09550.33.05950.35.05950.35.19550.38.09550.35.3.2质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI）。b）扫描方式：负离子扫描。c）干燥气：氮气，温度350℃，流速10L/min。d）雾化器：氮气，压力40psi。e）毛细管电压

6、：4000V。f）检测方式：多反应监测（MRM）。g）质谱参数见表3。—19——表3舒巴坦的质谱参数定性离子对定量离子对裂解电压碰撞能量化合物m/zm/zVeV232.1>140.14舒巴坦232.1>140.170232.1>64.0305.4标准曲线的制作取空白试样按照5.1步骤制备空白基质溶液，将标准工作溶液（3.3.2）用空白基质溶液逐级稀释得到所需浓度系列的标准溶液，按浓度从低到高依次经液相色谱-串联质谱测定，以定量离子的峰面积为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标，得标准工作曲线。舒巴坦的LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见附录A中的图A.1。5.5定性测定在相同试验

7、条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且试样中定性、定量离子的相对丰度比与浓度接近的标准溶液中对应的定性、定量离子的相对丰度比进行比较，若偏差不超过表4规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物。表4定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对丰度（%）＞50＞20—50＞10—20≤10允许偏差（%）±20±25±30±505.6定量测定本方法采用外标标准曲线法定量。以不同浓度的标准溶液浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，作标准曲线线性回归