资源描述：
《聚乙二醇修饰羊生长激素的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中子民科大学学报手聚乙二醇修饰羊生长激素的初步研究升聂磊麦荫乔生化教研室赵秋宇王树歧程玉华吉林大学酶工程实验室提要使乙二醇修饰羊生长激素,。,分别获用非抗原性聚一。。一。。得氨基修饰率为和的氨基修饰率为的仍保留了与天然抗,一。。,。,血清的反应性但修饰率为的则丧失了荧光光谱分析表明与天然比较修一。仅其荧光强度有所减,,一饰率为的弱光谱图并未改变但修饰率为的。,。则发生了明显的图谱变化体内结合试验表明两种修饰与肝受体结合之能力均有明显降低一准,关锐词生长激素聚乙二醇修饰抗原性与生物活性荧光光谱体内结合试验
2、中图号,。近年来使用水溶性非抗原性大分子物质饰剂据悉尚未有使用大分子修饰剂进行修饰。,作为修饰剂来改造生物大分子的性质已成为酶以求解除其抗原性的研究报道为此作者选用、。了线形无抗原性无电荷的分子作为修饰或蛋白质工程之最为活跃的研究领域之一这,。类常用的修饰剂有聚乙二醉甲基纤剂来修饰羊垂体生长激素的游离氨、。,,,维素右旋糖醉和肝素等迄今为止利用这基以期解除其抗原性减弱免疫原性而最大、。。类修饰剂修饰和改造了尿激酶天门冬酞胺限度地保留生物活性这仅是个初步实验、、。酶弹性蛋白酶链激酶等修饰的结果使得,材料与
3、方法这些酶的抗原性和免疫原性减弱但仍然保留,,〔”。大部分生物活性而且使其半衰期延长抗酶的制备按的方法进行。,解能力和耐热性增强最近对激素分子的改纯度鉴定①聚丙烯酸胺凝胶电泳。造方面的研究也取得了可喜的进展李逢,〔为条带与以往报道的结果一致、②〔‘〕,春等使用右旋糖配对胰岛素进行了共价修一分析表。,,饰结果表明修饰胰岛素较天然胰岛素之降明产品纯度大于③体重法检定其生物活,。血糖活性明显提高并增强了热稳定性和抗酶性为。。解能力的活化采用三聚氯氰法活化的,,生长激素为大分子蛋白质激素过程大致如下取单甲基聚乙
4、二醇,。,,分子量约为一远高于胰岛素目日本进口分装无水三聚,,,前基因工程取得了突破性进展使能氯氰四平化工厂生产无水苯。。,广泛应用于农业生产和临床治疗成为可能但棍合再加入分子筛于℃条件下,,,。是由于本身的抗原性连续注入机体可激烈搅拌回流小时反应完毕经漏斗。,产生特异性抗体而使之失效在以往的报道抽滤以除去反应液中杂物再用石油醚抽攀活,,。中的化学修饰均采用小分子物质作为修化竺一次干燥后密封保存荟白求恩医科大学中山医科大学学报。。。。游离氨基的修饰溶于值表示肝对特异结合率,的硼酸氢氧化钠缓冲液荧光光谱分
5、析样品溶于磷酸缓冲液蛋,,中按托扩游离氨基和加入白质浓度为一使用日立,。。。于℃水浴中振荡反应分钟然荧光光度计测定其荧光光谱和荧光强度,。后加入倍于反应液体积的预冷磷酸缓冲液激发光波长为,。。以终止反应经超滤,。结果与讨论去除未反应的和盐分后冻干备用〔‘,。游离氮基的修饰率与抗原性根据业已确蛋白质浓度的测定用考马斯亮蓝法,。定的。一级结构该分子含有个赖氨酸游以电泳纯牛血清白蛋白为标准,一一游离氨基的测定采用三硝基苯磺酸离氨基另加末端的氨基即总共有。,。个为一种线性游离氨基修饰剂通常法一。一。。抗血清的制
6、备选用新西兰大白兔只与氨基和赖氨酸的氨基反应在本实,。,,验室条件下游离氨基的修饰率分别为雄性体重为首次于脚掌。。,和表注射加完全福氏佐剂两周后于背部皮下多点注射加不完全福氏表游离氨丛的修饰率与抗原性变化。,佐剂再过两周后取溶于生游离氨修饰率与抗血清,。,分两次隔周皮下注射最后用含反份理盐水基总数应,生理盐水耳静脉强化注射次天然。周后颈动脉切开取血制得的抗血清效价大修饰。,。于抗原性测定用离子琼脂双向扩散。法,’一〔’,的制备参照方法略。一。”,‘加修改取北京原子能研究所签、、,十,一,深沉淀线浅沉淀线
7、无沉淀线提供加入尖底小塑料离心管内加入时,‘,件当使用离子琼脂双向扩散法检测修饰前后。,,,棍匀然后力入件和林氯胺的抗原抗体反应时结果发现修饰率为的。。反应总体积应小于衅振荡反应分与天然免疫兔产生的抗血清仍。,。钟后加入适量和以终止反应出现了沉淀线提示这一修饰程度并未将‘’一。的分离使用预先用牛血清白蛋与抗体结合的抗原决定簇完全掩埋起来但一,,一。白磷酸盐缓冲液平是修饰率为的则完全不出一。‘’一,衡好。的柱层析收集现沉淀线表明此时已将针对天然抗体,。,单体峰用于实验其比放射性约为林加的抗原决定簇完全掩盖
8、起来了使之抗原性消体内特异性结合实验参照和。失〔‘’。,所述方雌性大鼠。法进行荧光光谱如图所示比较天然,一。每。随机分组只动物经股静脉准确注射与之荧光图谱修饰图谱经,”一,,竞争组加竞争物或放大处理我们发现修饰率为的。。,,。注射后分钟眼球摘除取血分别从与天然基本一致而修饰率为,。一。。个肝叶切取肝片总重量约为。测定每克的则发生了显著变化这种变化表,。血清布肝片的位以肝和血清的比明分子构象发生了改变虽然修饰率为咤,·聂一血等聚乙却夔修饰兰生
