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《酶电极上葡萄糖氧化酶的活性的X射线微区分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第25卷,第7期光谱学与光谱分析Vol.25,No.7,pp1151-11542005年7月SpectroscopyandSpectralAnalysisJuly,2005==============================================================================酶电极上葡萄糖氧化酶的活性的X射线微区分析李彤,姚子华*,仇满德,安伟,史大刚河北大学化学与环境科学学院,河北保定071002摘要利用X射线微区分析,对二氧化硅溶胶-凝胶包埋于普
2、鲁士蓝修饰玻碳电极上的葡萄糖氧化酶的活性进行了分析;以Ce(NO为捕捉剂,底物葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用产生过氧化氢,后者与捕捉剂反应3)3生成沉淀于酶的活性部位。从X射线微区分析结果表明:酶电极表面固定化酶的分布均匀,且保存较高的酶活,从微观的角度说明了酶电极的性能与酶电极表面酶活分布的关系。此法制备的葡萄糖氧化酶电极具有较高的灵敏度,稳定性,这与电化学测试结果是一致的。主题词X射线微区分析;葡萄糖氧化酶;酶电极;酶活中图分类号:O657.9;O657.1文献标识码:A文章编号:1000-0593(2
3、005)07-1151-04捕捉剂,电极上其他修饰物质、固定化酶与捕捉剂,捕捉剂引言与底物之间的干扰。我们已报道的固定化葡萄糖氧化酶活性[5]X射线分析是利用铁离子作为捕捉剂,生成金属沉淀,聚近年来,随着生物传感器的迅猛发展,作为生物传感器焦电子束对固定化酶表面进行激发,有活性的部位发射出Fe中研究的最多,应用最广的电化学生物传感器的研究更是引的特征X射线,利用X射线能谱分析即可定位酶的活性部起人们极大的关注。我们研究制备安培型葡萄糖氧化酶传感位。由于我们研究使用的酶电极是利用普鲁士蓝修饰电极结器时[
4、1],发现酶电极表面的性质如致密性、酶分布的均匀程合二氧化硅溶胶-凝胶膜固定葡萄糖氧化酶的,因此不能用度等对其性能有一定的影响。以往对修饰电极的表征手段多铁盐作为捕捉剂。本工作研究了利用X射线微区分析对酶电是对其表面形貌的分析[2,3],也有报道对电极上酶的活性大极上凝胶膜中活性葡萄糖氧化酶定位的可能性和最佳定位条小进行分光光度法宏观估测的[4],但都不能说明表面酶的分件的选择。利用铈盐作为捕捉剂,葡萄糖为底物,经葡萄糖布情况。如果能对酶电极上的酶活进行定位,清晰地确定电氧化酶电极表面溶胶-凝胶膜固定
5、的酶与其作用得到H2O2,极上酶及酶活的分布,将有助于电极上酶的固定化方法研究与Ce(Ⅲ)在弱碱性条件下生成过氧化氢氧化铈沉淀而沉积以及酶电极性能的研究。于活性部位,进行X射线微区分析,结果表明,此法可从微在我们以前的报道中,首次用SEM-EDS-IPP进行X射观的角度说明葡萄糖氧化酶电极上酶的活性及分布。并对使线能谱微区分析研究固定化酶酶活的定位[5-7],其原理是基用过的电极表面酶活定位分析,从而说明该酶电极的高灵敏于组织和细胞化学中酶的化学定位[8],利用金属盐法进行固性和高稳定性,这与电化学研
6、究的结果是一致的[1]。定化酶活性定位X射线微区分析的。酶1实验部分底物→产物+捕捉剂(金属离子)→活性部位沉淀。底物经固定化酶的酶活催化生成产物,捕捉剂与产物结1.1材料与仪器合成难溶于水的沉淀,沉积在酶的活性部位上,利用聚焦电KYKY-1000B扫描电镜(附ThermoNORANVantage子束对固定化酶表面进行激发,有活性的部位发射出沉淀金能谱仪);Si(Li)探测器(Be窗厚7.6µm;测量范围Na～属的特征X射线,利用X射线能谱分析即可定位活性部位。U);LK98BⅡ微机电化学分析系统,玻
7、碳电极(GCE,φ为3据我们所知,未见关于酶电极上酶活定位X射线分析报道。mm)(天津市兰力科化学电子高技术有限公司);超级恒温器本研究将此法扩充到酶电极表面的酶活定位。对酶活进行X(上海市实验仪器厂)。射线微分析,首先要求选择一个合适的捕捉剂,主要满足以葡萄糖氧化酶(GOD,E.C.1.1.3.4,234,900units·下条件:①捕捉剂只与酶促反应产物起反应生成难溶于水的-1g,美国Sigma公司;β-D(+)-葡萄糖(分析纯,北京瀛海沉淀,而不与底物起反应;②要排除膜载体与底物、载体与精细化工
8、厂);六水合硝酸铈(分析纯,中国医药集团上海化收稿日期:2004-03-01,修订日期:2004-07-06作者简介:李彤,女,1963年生,河北大学化学与环境科学学院副教授,在读博士研究生*通讯联系人1152光谱学与光谱分析第25卷学试剂公司);其余化学试剂均为分析纯。所用水均为二次重蒸水。1.2葡萄糖氧化酶电极及对照电极的制备具有"三明治"结构的葡萄糖氧化酶电极(SiO2/GOD/PB/GCE)是由二氧化硅溶胶-凝胶包埋葡萄糖氧化酶于普鲁士蓝(PB)
